第三章 培养基及其配制

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1、第三章培养基本章的教学目标熟悉培养基的组成成分及其作用了解培养基的基本类型及其特点掌握培养基的配制、保存方法。本章的主要内容培养基的成分培养基的类型及特点培养基的筛选、配制和保存培养基的概念培养基（medium）是外植体生长的物质基础，它的组成对离体的植物器官和组织的生长起着重要作用。没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.6mg/L，MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.3mg/

2、L。MS+6-BA3.0mg/L+2,4-D0.2mg/L。MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.1mg/L。一、培养基的主要成分无机营养成分有机营养成分植物生长调节物质附加物和天然的有机添加物质琼脂pH值无机营养又叫矿质营养，指植物在生长发育时所需要的各种维持其正常生理活动的化学元素。主要有：大量元素：微量元素：（一）无机营养成分＞0.5mmol／L＜0.5mmol／LN：作用：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分形式：NO3—N和NH4—NP：作用：是磷脂的主要成分。形式：K

3、H2P04或NaH2P04K：作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。形式：KCI、KN03等盐类Mg、S作用：Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。形式：MgSO4·7H20Ca：作用：Ca是构成细胞壁的一种成分，对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用形式：CaCl2·2H2O。1.大量元素：主要元素：Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。Fe:作用：是某些酶的组成成分：氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的

4、分化和幼苗转绿有促进作用。形式：FeSO4·7H20和Na2—EDTA思考：为何不用Fe2（SO4）3，和FeCl3？B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。2.微量元素：（二）有机营养成分碳源维生素肌醇（环己六醇）氨基酸种类：最常用：蔗糖葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。作用：糖作为碳源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架为细胞的呼吸代谢提供底物与能源同时维持一定的渗透势，并且能够维持一定的渗透压（一般在1.5～4.1×10

5、５Pa）。浓度：在2%—3%，常用3%。高压灭菌时，一部分糖会发生分解，制定配方时要给予考虑。在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。1、碳源蔗糖（0%）蔗糖含量（1%）蔗糖含量（5%）外植体完全被绿色的芽所包裹，根生长在其下表面在外植体上既没有芽发生，也没有根和愈伤组织产生在外植体上表面边缘产生芽，也有一些根发生芽从外植体的上表面发生而根从下表面发生tissuecultureintheAfricanViolet（非洲紫罗兰）主要作用：是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。主要种类

6、：VBl(盐酸硫胺素)：愈伤组织的产生和生活力有重要作用VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长Vpp(烟酸)：植物代谢和胚的发育有一定关系Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用生物素、叶酸、VB12等。一般用量为0.1—1.0mg／L。2、维生素3、肌醇（环己六醇）作用：在糖类的相互转化中起重要作用。适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。使用浓度一般为l00mg／L作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。丝氨酸和谷氨酰胺有利于花

7、药胚状体或不定芽的分化。甘氨酸能促进离体根的生长，对植物组织培养物的生长也有良好的促进效果。种类：最常用：Gly其他：如Arg、Glu，Gln、Asp、Asn、Ala等也常用。用量为2～3mg/L4、氨基酸生长素类(auxin)（三）、植物生长调节物质细胞分裂素类赤霉素类生长抑制剂类1、生长素类(auxin)：作用：主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。浓度：0.05－5mg／L。种类：IAA：天然存在的生长素，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小、，高温高压

8、易被破坏，也易被细胞中的1AA分解酶降解，受光也易分解。NAA：耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。IBA：促进发根能力较强的生长调节物质。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。2，4—D：起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。强弱顺顺序为：2,4-D＞NAA＞IBA＞IAA溶于95％酒精或0.1mol