大专学生迎新宿营专案-流星花园民宿

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1、★精品文档★生物选修一5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段学案（人教版）课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段问题导学一、PcR的原理活动与探究11．细胞内DNA复制需要的基本条件有哪些？该条件在DNA复制中起何作用？2．什么是引物？它有什么特点？用于PcR的引物一般长度是多少？3．讨论：DNA合成的方向有什么特点？两条子链的合成起始于DNA的同一端吗？4．PcR技术中，高温能使DNA双链解旋，但也会导致DNA聚合酶失活，如何解决？迁移与应用1PcR过程中起催化作用的酶是（　　）。A．解旋酶　　　B．RNA聚合酶c．TaqDNA聚合酶D．DNA连接酶细胞内DNA复制与PcR技术的比较

2、细胞内DNA复制PcR2016全新精品资料-全新公文范文-全程指导写作–独家原创13/13★精品文档★不同点解旋解旋酶催化，部分解旋解链95℃高温解旋解链，双链完全分开酶解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶TaqDNA聚合酶能量ATP不加温度体内温和条件95℃→55℃→72℃特点整个DNA复制，只在分裂间期复制一次目的基因片段，按需要无限扩增相同点①需DNA模板；②需脱氧核苷酸作原料；③子链延伸方向都是从5′端到3′端；④都遵循碱基互补配对原则，半保留复制注：解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开，而DNA聚合酶都是催化形成磷酸二酯键的。二、PcR的反应过程活动与探究21．PcR一

3、般要经历30多次循环，每次循环可以分为哪几步？2．PcR循环之前，常要进行一次预变性，预变性的目的是什么？3．PcR循环过程中，变性温度设置94℃，时间设置30s的原因是什么？2016全新精品资料-全新公文范文-全程指导写作–独家原创13/13★精品文档★4．PcR缓冲液相当于细胞内的什么成分？5．当PcR反应体系的温度由变性后缓慢冷却到50℃左右时，引物与模板可结合，而解开的两个DNA模板链能够重新结合吗？为什么？6．PcR过程中的DNA聚合酶能对最初的DNA模板进行完整的复制吗？为什么？7．决定PcR反应特异性的原因有哪些？迁移与应用2利用PcR技术扩增某DNA片段得到下图所

4、示产物，则该产物至少经过几次循环才能产生？（　　）A．1次B．2次c．3次D．4次1．PcR反应过程图解（1）变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解旋为单链，如下图：（2）复性：系统温度下降至55℃时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：（3）延伸：当系统温度上升至72℃2016全新精品资料-全新公文范文-全程指导写作–独家原创13/13★精品文档★左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸（A、T、G、c）在DNA聚合酶的作用下，据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图：2．PcR过程的温度条件和时间控制变性复性延伸预变性94℃，5in——30次94℃，30s55

5、℃，30s72℃，1in最后一次94℃，1in55℃，30s72℃，1in三、PcR实验操作和结果分析评价活动与探究31．讨论PcR实验过程中有哪些注意事项。2．如何判断DNA扩增成功？迁移与应用3PcR实验中使用的微量离心管、缓冲液以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是（　　）。A．反复洗涤B．用酒精擦洗c．高压灭菌D．在－20℃下储存1．PcR体外扩增DNA片段的实验流程准备　(按照PcR反应体系的配方将所需试剂摆放于实验桌上)2016全新精品资料-全新公文范文-全程指导写作–独家原创13/13★精品文档★移液　(用微量移液器按照配方在微量离心管中依次加入各组分)混合　(盖严离

6、心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁)离心　(将微量离心管放在离心机上，离心约10s。目的是使反应液集中在离心管底部)反应　(将离心管放入PcR仪中，设置程序进行反应：变性―→复性―→延伸)2．实验中DNA含量的测定DNA在260n的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关。可以利用DNA这一特点进行DNA含量的测定，具体方法如下：（1）稀释：2μLPcR反应液，加入98μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释（2）对照调零：以蒸馏水作为空白对照，在波长260n处，将紫外分光光度计的读数调节至零（3）测定：取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260n处的光吸收值2016

7、全新精品资料-全新公文范文-全程指导写作–独家原创13/13★精品文档★（4）计算：DNA含量（μg/L）＝50×（260n的读数）×稀释倍数3．几种PcR方法有反转录PcR、扩增未知序列的PcR、致突变PcR、定量PcR、免疫PcR等方法，PcR还可与其他方法联合使用，有很多新的联合法。（1）反转录PcR反转录PcR就是把RNA提取后反转录成互补DNA，并以此互补DNA链为模板进行的PcR反应。通常用于检测某种RNA是否被表达，或者比较其相对表达水平。（2）实时荧光定量PcR所