hiv抗体检测的标准操作程序(elisa法和快速法)

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1、HIV测定（ELISA法）标准操作规程1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。2、原理采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV（1+2）型抗体抗原结合，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。3、性能参数灵敏度高（0.5

2、ng/ml）4、标本要求（1）标本类型：血清，血浆。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。本文来自检验地带网5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。（2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司（3）包装规格：96T/Kit（4）试剂盒组成：①、HIV酶标板；②、HIV酶标试剂；③、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；④、显色剂A液和B液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、

3、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。7、仪器设备：酶标仪：ZS板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。洗板机：DNM-9620型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。8、校准程序9、操作步骤①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备用。②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl，用封板膜封板后置37℃温育60min。④、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选

4、择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。⑤、加酶：每孔加酶结合物100μl（空白对照孔除外），充分混匀，用封板膜封板后置37℃温育30min。⑥、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。⑦、显色：每孔加入底物缓冲液50μl，TMB50μl，轻轻振荡混匀，封板后置37℃避光显色10min。⑧、测定：每孔加终止液50μl，轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），空白调零，读取各孔OD值。⑨、判断结果：计算临界值（cut-off）值。临界值=阳性对照值×10%。（若阳性对照OD值＞2.5按2.5计算）

5、正常情况下，阴性对照孔的OD值≤0.08。样品OD值＜临界值者为HIV抗体阴性。若1孔阴性对照的OD值＞0.08应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值＞0.08，应重复实验。本文来自检验地带网正常情况下，阳性对照孔的OD值≥0.80。样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性。若1孔阳性对照的OD值＜0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值＜0.8，应重复实验。注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照《全国HIV检测管理规范》送HIV确证实验室进行确证试验。10、质量控制：每块板设阴阳性及空白对照，并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔O

6、D值采用“即刻法”计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11、干扰和交叉反应12、生物参考区间正常人阴性。13、患者检验结果的可报告区间阳性表示HIV病毒感染。14、临床意义用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。15、其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有"检定合格"防伪标签的试剂。HIV测定（胶体金法）标准操作规程2010-12-28来源:检验地带网浏览:703次转发至：【字号：大中小】核心提示：1、检验目的用于体外、肉眼观察、定性的免

7、疫分析，监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。2、原理利用双抗原夹心法检测HIV抗体。标本加入反应板，若标本中含有HIV抗体时，先与金1、检验目的用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。2、原理利用双抗原夹心法检测HIV抗体。标本加入反应板，若标本中含有HIV抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体-金标抗体复合物，在虹吸