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时间:2018-07-08
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1、钩藤散浸膏对亚急性衰老模型小鼠的影响论文.freelemory,malondiadehyde(MDA),superoxidedismutase(SOD),ACHEinmicetostudytherapeuticeffectsandmechanismofGoutengsanonagingmodel.MethodsMicelydividedinto6groups.Allgroups,exceptthecontrol,inistrated(ip)entalgroupsinanextract-treatedmiceiceentofcholinergicnerves
2、ystem.【Keyice老年痴呆是威胁人类健康的重大疾病之一,对其的防治一直是全球关注的焦点。钩藤散源于《本事方》,由钩藤、石膏、陈皮、麦冬、半夏、茯苓、人参、防风、生姜、甘草、菊花等11味药组成,原为治疗肝厥头晕之证的经典方剂。本次实验进行了钩藤散浸膏的抗衰老实验,以观察钩藤散浸膏在抗衰老方面的影响及机制。1材料1.1药品与试剂(1)钩藤散:由本院中药制剂室按传统方法水提、浓缩、消毒等制成浸膏。临用前每19ml钩藤散浸膏加蒸馏水配至100ml,变成0.5g生药/ml清膏溶液,实验中所用剂量均以生药量计。(2)维生素E胶丸:厦门鱼肝油厂(批号:10842
3、002)。用前将维生素E胶丸用蒸馏水按10粒/100ml蒸馏水配成溶液。(3)D-半乳糖:国药集团化学试剂有限公司(批号:20050121)。(4)乙酰胆碱酯酶(ACHE)活性测定试剂盒:南京建成生物工程研究所(批号:20050225)。(5)超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒:南京建成生物工程研究所(批号:20041221)。(6)丙二醛MDA活性测定试剂盒:南京建成生物工程研究所(批号:20041224)。1.2动物清洁级KM小鼠:18-22g,雌雄各半,由中科院上海实验动物中心提供,许可证号:SCXK(沪)2002-0010。1.3仪器(1)MG
4、-2迷宫:张家港市生物医学仪器厂生产。(2)高速冷冻离心机:贝克曼产品。(3)721分光光度计:上海第三分析仪器厂产品。(4)高速分散器XHF-1:上海金达生化仪器厂产品。1.4实验环境清洁级,合格证号:SYXK(苏)2002-0007。2方法2.1分组、造模、给药将小鼠分为6组,每组12只,雌雄各半,先进行造模,正常对照组皮下注射等体积生理盐水(1ml/kg),其余各组每天皮下注射D-半乳糖,0.05g/kg体重,连续注射6周。注射7天后开始给药,实验高剂量组每天灌胃给10g生药/kg体重,中剂量组5g/kg,低剂量组2.5g/kg,阳性对照组每天给维生
5、素E0.05g/kg体重,模型对照组与正常对照组每天给等量的蒸馏水,每天灌胃1次,每次0.2ml/10g体重;连续给药5周。2.2学习训练[1]最后1天给药后1h进行学习训练,训练时,将小鼠放入Ⅰ臂起步区停留3min后给予电击(35V),按Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ→Ⅰ或Ⅰ→Ⅲ→Ⅱ→Ⅰ连续试验:a项:小鼠到达安全区停留0.5min,然后取出放回原臂,1min后给予下次电击,达到连续2次直接逃至安全区后,以逃入的安全区作为起步区进行电击训练。当小鼠在三臂均达到连续2次直接逃至安全区后,进行b项试验:小鼠在Ⅰ臂起步区停留1min后给予电击,逃至安全区停留0.5min,再以此区
6、作为起步区予以电击,连续循环电击训练(每两次电击之间休息1min),以小鼠连续10次(或9/10)正确反应(直接逃入安全区)作为空间辨别记忆指标,每回连续学习的电击总次数一般不超过30次。最后将a项和b项相加作为训练成绩。2.3记忆测试训练后24h进行测试,测试方法同训练,将a项和b项相加作为学习成绩。2.4血中SOD、ACHE测定测试后眼眶取血,3000r/min离心,取上清液按试剂盒说明书所述步骤操作,测定ACHE、SOD活力。2.5脑中MDA的测定小鼠取血后处死取脑,置匀浆器中,加入预冷生理盐水制成10%(g/ml)的脑匀浆,按试剂盒说明书所述步骤操
7、作,测定蛋白质含量和MDA含量。2.6统计学分析数据用x±s表示,组间比较用t检验。3结果3.1对学习记忆的影响模型组训练、测试成绩都极显著差于正常组(P<0.01),说明造模成功;实验组训练、测试成绩都和正常组相近,而极显著地好于模型组(P<0.01),说明给药后钩藤散浸膏抑制了D-半乳糖所致的衰老,使记忆恢复如常,见表1。表1钩藤散浸膏对D-半乳糖衰老模型小鼠记忆的影响(x±s,n=12)Tab.1EffectsofGTSextractonmemoryofmicedodderymodelscreatedbyD-galactose注:与模型组比较,*P<
8、0.05,**P<0.01,***P<0.001;与正常组比较,△
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