灵芝多糖对糖尿病大鼠肾组织tgf

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1、灵芝多糖对糖尿病大鼠肾组织TGF作者：毛春谱，李小毅，张红梅，林桂芬，李伟【摘要】目的观察转化生长因子β1(tgf-β1)及ⅳ型胶原（co-ⅳ）在糖尿病大鼠肾组织中的表达及灵芝多糖干预后的影响。方法腹腔注射链脲佐菌素（stz）诱导大鼠造成糖尿病模型，分组予不同剂量灵芝多糖（glp）进行治疗性灌胃。8周后，用免疫组化方法和rt-pcr方法检测各组大鼠肾皮质tgf-β1、co-ⅳ的蛋白和mrna表达。结果糖尿病组大鼠肾小球tgf-β1、co-ⅳ蛋白和mrna表达较正常对照组明显升高（p＜0.01）；灵芝多糖各组较糖尿病组表达降低（

2、p＜0.01）。结论灵芝多糖可能通过下调糖尿病大鼠肾脏中tgf-β1和co-ⅳ的表达，减少细胞外基质积聚，起到对糖尿病大鼠肾脏保护作用。【关键词】灵芝多糖；糖尿病肾病；转化生长因子β1；ⅳ型胶原　　abstract：objectivetoinvestigatetheexpressionsoftransforminggroalucidumpolysaccharides（glp）onsuchchanges.methodsdiabeticratmodelg/kg）andtheratslyandtreatedinedbyimmunoh

3、istochemistryandrt-pcrmethods.resultsparedrnatgf-β1、co-ⅳsignificantlyincreasedinglomeruli（p＜0.01）.theabnormalexpressionsoftheseproteins、mrnaaticallyimprovedindiabeticratsbyglptreatment（p＜0.01）.conclusionglphassomerenalprotectiveeffectondiabeticrats，throughinhibition

4、ofexcessivedepositionofglomeruliextracellularmatrixbyinhibitingtheexpressionoftgf-β1anddecreasingthesynthesisofco-ⅳ.　　keyalucidumpolysaccharides；diabeticnephropathy；transforminggroalucidumpolysaccharides，glp）、三萜类化合物、灵芝酸、腺苷等，其中glp是最有效的活性成分之一。灵芝的药理活性大多和glp有关，其具有广泛的药理活

5、性［1］，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抗氧化［2］，抗辐射和降低血脂［3］等作用，但对dn的作用报道很少。本研究采用免疫组化和rt-pcr方法观察灵芝多糖不同剂量组对糖尿病大鼠肾组织的转化生长因子β1（transforminggroa公司），灵芝多糖（河北保定施达科生物工程技术有限公司，批号：rm051215）。一抗分别为兔抗大鼠tgf-β1、co-ⅳ抗体、sp-6001试剂盒及dab试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司），totalrna提取试剂、rt-pcr试剂盒（大连宝生物有限公司）。leicaq组

6、，n＝10），灵芝多糖低剂量组（glp-1组，n＝10），灵芝多糖中剂量组（glp-2组，n＝10），灵芝多糖高剂量组（glp-3组，n＝10），分笼饲养。dm组和glp-1、glp-2、glp-3组大鼠在禁食12h后，于左下腹腔一次性注射stz（溶于0.1mmol/l柠檬酸缓冲液，ph4.4）60mg/kg，72h后，尾静脉采血测随机血糖≥16.7mmol/l，持续3d以上作为模型纳入本实验。c组仅予以等量柠檬酸缓冲液腹腔注射。40只大鼠经检测均造模成功。模型成立3d后glp-1、glp-2、glp-3组分别给予灵芝多糖水溶

7、液100，200，400mg/kg剂量进行治疗性灌胃，c组和dm组用等体积生理盐水灌胃。所有大鼠实验期间自由饮水进食，不使用胰岛素及其他降糖药物。每隔1周测量体质量（body，行he染色和免疫组化。　　2.5免疫组化研究采用sp二步法，石蜡切片厚4μm后常规脱蜡至水，3％h2o2阻断内源性过氧化物酶后，微波加热暴露抗原，滴加一抗tgf-β1（1∶100）、co-ⅳ（1∶120），4℃冰箱过夜，pbs洗片后滴加二抗，37℃孵育1h，dab显色控制在3～5min，复染、脱水、透明、封片。以吸光度值（a）表示，显色强度用leicaq

8、rna核苷酸序列，pcr引物用primerpremier引物设计软件设计，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成（见表1）。表1大鼠转化生长因子-β1(tgf-β1)、co-ⅳ及β-actin引物序列（略）　　取肾皮质100mg，加液氮研碎后，用trizol(大连宝生物工程有