三氧化二砷对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成素2和血管内皮生长因子表达的影响

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1、三氧化二砷对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成素2和血管内皮生长因子表达的影响：肖延风，刘陕西，邬德东，陈玺，任利芬【摘要】目的研究三氧化二砷(As2O3)对肿瘤血管生成素2(Ang2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用人胃腺癌细胞株SGC7901接种30只裸鼠皮下，建立实体瘤模型；然后随机分为As2O3高剂量(5mg/kg)、低剂量(2.5mg/kg)治疗组和对照组，每组各10只。治疗组接受As2O3腹腔注射10d，对照组注射生理盐水。测量肿瘤体积并计算抑瘤率；免疫荧光标记CD31并计算血管密度；免疫组化方

2、法测定Ang2的表达；免疫荧光激光共聚焦检测VEGF的表达。结果砷剂治疗可抑制瘤块生长，2.5mg/kg和5mg/kgAs2O3治疗组的抑瘤率分别为30.33%和50.85%。As2O3治疗组的微血管密度(MVD)、VEGF荧光表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。Ang2主要在血管内皮细胞的胞浆中呈强阳性表达，可清晰标记肿瘤内的血管；对照组和As2O3治疗组血管内皮细胞Ang2表达强度无明显差异。结论As2O3对Ang2表达无明显影响，在As2O3治疗抑制瘤细胞VEGF表达的情况下，Ang2表达可

3、促进血管的退化。Ang2主要在新生的内皮细胞表达，故可能作为新生血管的标记物，成为肿瘤新生血管研究的新指标。【关键词】三氧化二砷；血管生成素2；血管内皮生长因子；血管生成；胃癌；血管密度ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectofarsenictrioxide(As2O3)onexpressionofangiopoietin2andvascularendothelialgroormodeledinnudemiceicelydividedintothetg/kgand5mg/

4、kg)andcontrolgroup.As2O3iceinthetreatedgroupsfor10days;thesamevolumeofsalinesolutioneofgastrictumorxenograftseasuredandcountedfortumorgroeasuredmunofluorescence.Expressionofangiopoietin2munohistochemistry,andexpressionofVEGFmunofluorescencelaserconfocaltechnolo

5、gy.ResultsTumorgrog/kgand5mg/kgAs2O3,respectively.DecreaseofMVDappearedinAs2O3treatedtumorsparedorcellsostlyexpressedinendothelialcellsintumors.Thereayinducevesselregression,andVEGFexpressionisdecreasedbyAs2O3intumor.Angiopoietin2maybeeaneor.KEYL(4×106个SGC7901

6、细胞/只)接种于每只裸鼠右后肢背部皮下。1.2实验分组和药物干预裸鼠接种SGC7901细胞后，隔天观察一次，瘤块变硬，且长径大于0.5cm视为成瘤。于接种肿瘤细胞第10天，观察每只裸鼠均形成瘤节。于接种肿瘤细胞第11天按随机分组的原则将30只裸鼠分为As2O3低剂量治疗组(2.5mg/kg组)、高剂量治疗组(5mg/kg组)和对照组。分别腹腔注射As2O32.5mg/kg、5mg/kg及生理盐水0.2mL，每天1次、连续给药10d。1.3取材及固定于末次给药次日(即治疗第11天)，腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉，迅速取下瘤

7、块并称重后放入40g/L多聚甲醛溶液中固定，供制备冰冻切片和石蜡切片用。另外，取肝肾组织制备石蜡切片，HE染色，观察组织形态学变化。1.4抑瘤率(tumorgrom3)=ab2/2，抑瘤率=(1-治疗组平均瘤块体积/对照组平均瘤块体积)×100%。1.5血管生成素2表达的检测采用免疫组化法，步骤如下：①脱蜡、脱水，取出制备好的石蜡切片在以下液体中浸泡：二甲苯15min→二甲苯15min→无水乙醇10min→95%(体积分数)乙醇10min→80%(体积分数)乙醇10min；②纯水浸泡，2×5min；③滴加H2O2，置

8、湿盒中室温下孵育10min；④纯水冲洗，PBS浸泡5min；⑤滴加山羊血清，37℃下孵育20min，倾去，勿洗；⑥滴加一抗，为兔抗人Ang2多克隆抗体(美国SantaCruz生产)，37℃条件下孵育3h；⑦PBS冲洗，3×5min；⑧滴加羊抗兔IgG，37℃条件下孵育15min；⑨PBS冲洗，3×5min；⑩滴加过氧化酶标记的辣