耐多药结核分支杆菌基因突变在耐药性检测中的应用

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1、耐多药结核分支杆菌基因突变在耐药性检测中的应用【摘要】目的探讨耐多药结核病（MDR-TB）临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术分析了54株同时耐异烟肼（INH）、利福平（RFP）、链霉素（SM）的多耐药临床分离株和45株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果以结核分支杆菌H37RV为对照，45株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常，其特异性为100%；KatG基因有2株图谱异常

2、，特异性为95.6%。89株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失，其PCR扩增产物SSCP分析结果表明：54株多耐药临床分离株中，49株rPOB基因图谱异常；32株KatG基因图谱异常；40株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB(90.7%)、KatG(59.3%)，rpsL(74.1%)。结论结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。【关键词】结

3、核分支杆菌；rPOB基因；KatG基因；rpsL基因；SSCP；药物耐受性StudiesofMycobacteriumtuberculosismulti-drugresistantgene【Abstract】ObjectiveToevaluattheimportanceofrPOB、KatGandrpsLgenemutationdetectioninmulti-drugresistantclinicalisolatesofMycobacteriumtuberculosis.MethodsrPOB、Ka

4、tGandrpsLgenemutationof54multi-drugresistantclinicalisolates，resistanceand54drugsusceptiblestrainserasechainreaction-singlestrandconformation(PCR-SSCP).ResultsSSCPpatternofH37RVstrainascontrol，SSCPpatternofrPOB，rpsLPCRamplificationfromdrugsusceptiblestr

5、ainseascontrol.Thespecificitycontrolin49drugresistantclinicalisolates.SSCPpatternsofKatGgenecontrolin32drugresistantclinicalisolates，SSCPpatternofrpsLgenecontrolin40drugresistantclinicalisolates.ThesensitivityajormechanismofRFP，INH，SMresistantdrugutatio

6、n，respectivelyPCR-SSCPmaybeoneofthetuberculosis.【Keytuberculosis；rPOBgene；KatGgene；rpsLgene；SSCP；drugtolerance我国是结核病疫情最严重的国家之一，其主要原因是耐药（DR-TB）和耐多药（MDR-TB）结核病的广泛分布和迅速传播。由于单药化疗和不规则化疗，其耐药情况越来越严重。近年来随着分子生物学的研究进展人们对抗结核分枝杆菌的药理作用位点和结核分枝杆菌耐药机制，尤其是耐异烟肼、利福平和链霉素。目

7、前，结核分支杆菌耐药性测定仍多采用绝对浓度法、比例法等经典方法。但由于结核分支杆菌生长缓慢，而耐药结核分支杆菌生长更为缓慢，其耐药性测定需6～8周甚至更长，不能及时指导临床用药。新进开展的Bactec法药敏检测因其价格昂贵等诸多不便限制了其广泛使用。据报道［1］INH耐药与过氧化氢酶-过氧化物酶的编码基因（KatG）有关、而某些结核分支杆菌耐SM的产生是由于其核糖体蛋白S12编码基因（rpsL）和16SrRNA编码基因（rrs）突变所致［2］，同时也证实了结核分支杆菌耐利福平与RNA聚合酶的β亚基的编

8、码基因rPOB的突变有关［3］。笔者采PCR-SSCP银染法对54例（同时耐INH、RFP、SM）和45例（药物敏感）肺结核病人痰标本临床分离株同时进行KatG基因、rPOB基因和rpsL基因突变分析。1材料与方法1.1菌株来源H37RV标准株来源于中国药品生物制品检定所，45例敏感株和54例同时耐INH、RFP、SM的临床分离株来自珠海市人民医院、沈阳市胸科医院等。按结核病诊断细菌学规程进行菌种鉴定及药敏试验证实为结核分支杆菌，耐药株则同时对异烟肼、利