磺胺类（sar）酶联免疫分析（elisa）

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1、磺胺类（SAr）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书1酶免分析步骤1.1实验须知1.1.1实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。1.1.2使用后请立即将试剂放回2~8℃保存1.1.3请不要改变分析程序1.1.4请使用精确的微量移液器1.1.5操作一旦开始，请不要中断任何程序1.1.6ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作1.1.7为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不

2、同的吸头加样1.1.8加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面1.2分析步骤1.2.1预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测1.2.2取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存1.2.3样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（10×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)1.2.4在B0孔中加入50μl0.0ng/ml标准品溶液1.2.5在各标准孔中加入50μl的标准品溶液1.2.6在各样品孔中加入50μl样品溶液1.2.7在所有孔中加入50μl的磺胺类（SAr）抗体酶结合物1.2.8轻轻晃动反应板几秒钟。1.337℃温浴30m

3、in（温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）1.3.1甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。1.4反应1.4.1洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加50μl显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀1.4.237℃温浴10min1.4.3每孔中加入50μl终止液，混匀1.4.4在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。2结果计算2.1定量分析2.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。B—标准溶液或

4、样本溶液的平均吸光度值B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值2.1.2以磺胺类（SAr）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为磺胺类（SAr）浓度的对数值，求得反对数即为测定液中磺胺类（SAr）浓度C（ppb）2.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。2.2半定量测定2.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。2.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与

5、样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。3特异性物质交叉反应磺胺嘧啶（SD或者SDZ）100%磺胺恶唑（SMZ）63%磺胺噻唑（ST）195%磺胺甲基嘧啶（SM1）12%4试剂盒参数本试剂盒检测下限为0.05ppbB0吸光度最佳值应大于1.0试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。5标准曲线模式（仅供参考）试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb。6分析限制本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。