一、还原糖含量的测定.ppt

《一、还原糖含量的测定.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、生物化学实验实验四植物组织中还原糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法学时：31、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。2、掌握比色法测定还原糖的操作方法。一、实验目的：1、还原糖：指含有游离的半缩醛(酮)基糖。单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖为非还原糖。2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。二、实验原理:2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应：在碱性条

2、件下，还原糖与DNS试剂反应，还原糖被氧化成糖酸及其它产物，DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色,A540)3,5-二硝基水杨酸(DNS)3、在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。1、实验材料：苹果（约0.5g）2、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。3、试剂：（1）0.5mg/mL葡萄糖标准液（2）3,5

3、-二硝基水杨酸（DNS）试剂(碱性)三、实验材料、仪器和试剂：四、实验步骤：1、葡萄糖标准曲线的绘制2、还原糖的提取3、样品含糖量的测定:1、葡萄糖标准曲线的绘制:取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。管号葡萄糖标准液mL蒸馏水mLDNSmL沸水浴光密度值OD540nm葡萄糖含量（μg）0(参比溶液)00.50.55min冷却010.10.45020.20.310030.30.215040.40.120050.502500.5χ1还原糖提取液蒸馏水mL4混匀2、还原糖的提取取0.5g样品于研钵中，加水2ml，充分研磨。用2ml

4、蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于10ml)，转入10ml离心管中。在50℃水浴中恒温20分钟，冷却后于4000r/min,离心5分钟。取上清转入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容，待测。3、样品含糖量的测定:取提取液0.5ml，按上表操作。还原糖含量(μg/g)=五、计算：还原糖含量χ1(μg)×样液总体积测定用样品液体积×样品鲜重(g)六、思考题：1、何谓还原糖？测定还原糖的方法还有哪几种?2、本实验的注意事项?测定还原糖其它方法(1)蒽酮比色法：强酸可使糖类脱水生成糠醛，糠醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，其颜色的深浅与糖含量成正比关系，在620nm波长下可测定

5、其光密度值。(2)砷钼酸比色法还原糖在碱性条件下加热，可以定量地还原二价铜离子为一价铜离子，即产生砖红色地氧化亚铜沉淀，其本身被氧化。氧化亚铜在酸性条件下，可将钼酸铵还原，还原型地钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用，生成一种蓝色复合物即砷钼蓝，其颜色深浅在一定范围内与还原糖地含量（即被还原的Cu2O）成正比，用标准葡萄糖与砷钼酸作用，比色后做标准，就可测得样品还原糖含量。(3)费林试剂滴定法费林试剂由甲乙两种溶液混合而成，甲液（硫酸铜）与乙液（氢氧化钠）生成天蓝色沉淀，在碱性溶液中，乙液（酒石酸钾钠）使氢氧化铜溶解生成一种络合物，还原糖在碱性加热条件下，可以定量还原费林试剂中Cu2

6、+为Cu1+,使费林试剂脱色，其脱色的程度与还原糖含量成正比关系。