植物细胞培养.ppt

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1、植物细胞培养主要内容定义植物细胞培养的方法植物细胞培养的培养基植物单细胞培养植物细胞培养的意义与应用举例植物细胞的生物反应器大规模培养植物细胞的两相培养技术植物细胞的生物反应器固定化培养植物细胞培养存在的问题与发展趋势一、定义在离体条件下将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行震荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种技术。小规模的悬浮培养可在培养瓶大规模在生物反应器二、植物细胞培养的方法根据培养的对象：单细胞培养单倍体培养：花药培养原生质体培养根据培养系

2、统：悬浮培养液体培养固体培养固定化培养植物细胞培养系统分类细胞培养固体培养液体培养琼脂糖培养固定化培养摇瓶悬浮培养反应器大规模培养分批培养半连续培养连续培养恒化培养恒浊培养能保持细胞活性的固定化将细胞包埋于海藻酸盐或卡拉胶中培养基（1）固体培养基：一般加有琼脂的培养基，琼脂浓度按需要而定，通常为0.6~1.0%（2）固体化培养基，让培养基形成固体不是琼脂而是海藻酸盐或卡拉胶，细胞被包于其中。（3）液体培养基：不加琼脂或海藻酸盐的培养基。培养方法：接种：将一定密度的细胞接种到细胞培养基上进行培养。几种主要的方

3、法（以培养基来分）固体培养平板培养，将一定浓度细胞的液体培养基涂抹在固体培养基表面（动物、植物、微生物适用）划线培养基：将沾有一定浓度细胞的液体培养基在固体培养基上划成工形的线，培养基可以是平面或斜面。多用于微生物。混合培养：将一定体积含有一定浓度细胞的少量液体培养基与快要凝固的固体培养基混合让细胞嵌入其中。饲养场培养：用X射线等处理细胞，让其无活性，分裂很慢，以此作为饲养细胞，再与所以培养的细胞（靶细胞）混合于固体培养中，饲养细胞提供合适的环境又不与靶细胞争夺营养。液体培养A.按量多少来分：a.微量培养：

4、微滴培养培养板培养b.一般量培养（培养皿、三角瓶、培养管等）c.大量培养：（悬浮培养，有连续和半连续培养，半连续纸到一定时间放去培养液再加等体积的培养液；连续培养至不断加入培养液不断放出培养细胞。固定细胞）微室培养目前可使用特制的凹穴载玻片与盖玻片做成的单细胞培养的小室进行培养。“双层盖玻片法”B．按震荡与否分为a．静置培养；b震荡培养（摇床、转床悬浮培养）C．是否加其他细胞培养：a．饲养层培养：将饲养细胞与靶细胞混合于液体培养基中.b．看护培养：将一块生长活跃的愈伤组织（或组织）放入培养基中，再在上放置一

5、层滤纸，滤纸上加上靶细胞进行培养。饲养层培养法看护培养用一块活跃生长的愈伤组织来看护单细胞使之持续分裂生长和增殖的培养方法。这个愈伤组织块称为看护愈伤组织，方法简便易行且效果好，有些用平板培养不能成功的细胞用此方法可取得成功，可能提供了促进细胞分裂的活性物质植物细胞多采用悬浮培养：可增加培养细胞与培养液的接触面，促进营养的吸收。可带走培养物产生的有害代谢物，避免高浓度聚集对细胞的伤害保证良好的混合状态，从而获得良好的气体传递效果。容易放大实现规模化；三、植物细胞的培养基培养基组成无机盐碳源植物生长激素有机氮

6、源：蛋白质水解产物、谷氨酰胺或氨基酸混合物，对初级培养的早期生长阶段有利。有机酸：丙酮酸等复合物质:椰子汁MS、B5、N6四、植物单细胞培养单细胞制备方法单细胞培养方法悬浮细胞的同步化方法细胞保存植物细胞培养的意义与应用举例（一）单细胞的制备方法1.直接方法2.间接方法1.直接法：（1）机械制备：①通过机械研磨，②切割植物组织，然后离心收集，可获得植物单细胞（早期）优点：对细胞无化学毒害，缺点：效率低，数量少。（2）酶法：是目前最有效的方法，对植物多用果胶酶除去中间层。优点：效率高，量大；缺点：但细胞常受到

7、酶影响（原生质体中介绍）2.间接法：愈伤组织法通过植物组织培养先让其产生愈伤组织，再通过高频振荡，将松散的愈伤组织分散成单个细胞，也可在震荡的同时加入一定的酶，效果好。此法在植物中较适用：但必须先诱导愈伤组织；优点：产量高（二）单细胞培养的方法平板培养法：看护培养与饲养层培养液体浅层静置培养细胞悬浮培养法平板培养将悬浮培养的细胞接种到未固化的薄层培养基中，使其与培养基充分混合，再倒入培养皿中进行培养的方法，是常用的单细胞培养法。单细胞悬液制备调节细胞密度培养基选择与凝固剂选择接种培养看护培养与饲养层培养是否

8、加其他细胞培养：饲养层培养：将处理过的（用X射线）无活性或分裂很慢、不具备分裂代谢能力的细胞来饲养所培养的细胞使其分裂和生长；将饲养细胞与靶细胞混合于液体培养基中.有四种：共同混合与琼脂糖培养基中饲养层位于下层，靶细胞位于上层一起培养与液体培养基中双层滤纸植板培养：看护培养：Muir于1953年创立用一块活跃生长的愈伤组织来看护单细胞使之持续分裂生长和增殖的培养方法。这个愈伤组织块称为看护愈伤组织简便、成功率高不