海参皂苷消化吸收特性探究说课材料.ppt

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1、海参皂苷消化吸收特性探究实验支撑条件本实验以食品科学与工程学院——人类健康实验室为依托，该实验室近年在海参加工和活性物质研究方面具有丰富的经验和雄厚的前期基础。人类健康实验室具备本实验所需以下仪器：动物实验设备（饲养室、钢丝笼），高效液相色谱-质谱（HPLC-MS/MS），基本的生化学试剂和有机溶剂。王玉明教授对海参的营养与活性、海参营养保持技术有深入的研究，具有较强的科研教学经验。实验内容1、海参粗皂苷的提取根据海参皂苷的化学性质，利用乙醇浸提法提取海参干粉中总皂苷，并进一步经过水饱和正丁醇萃取和大孔树脂纯化后得到总海参皂苷。2、海参皂苷溶液的配制将18

2、00mg海参总皂苷溶解于36ml生理盐水中，配成溶液，备用。实验内容3、动物实验3.1高剂量皂苷单体EA灌胃大鼠实验实验组7组*5只对照组4组*3只对照组4组*3只每只注射1ml皂苷溶液，剂量为50mg/只每只注射1ml生理盐水0、2、4、6、8、11h时对实验组的一组大鼠主动脉取全血处死0、2、8、11h对对照组的一只大鼠主动脉取全血处死另外，将实验各组大鼠消化道完整分离，收集消化道内容物，将8、11h实验组及对照组的大鼠放入代谢笼，收集其粪便和尿液。实验内容3、动物实验3.2低剂量皂苷单体EA灌胃大鼠实验实验组7组*3只每只注射1ml皂苷溶液，剂量为1

3、5mg/只0、0.5、1、2、3、4、7、9、11、24h时对实验组的一组大鼠主动脉取全血处死另外，将实验各组大鼠消化道完整分离，收集消化道内容物，将8、12、24h实验组及对照组的大鼠放入代谢笼，收集其粪便和尿液。实验内容4、血清皂苷单体EA液质检测方法的确定4.1血清样本的前处理（反相C18固相萃取柱萃取法）240μl血清加入360μl无水乙醇加入超纯水10ml甲醇和10ml水活化固相萃取柱将样品经固相萃取小柱将乙醇浓度稀释到10%1200r离心5min5ml水洗脱上清液混匀100μL色谱纯甲醇溶解提取物40℃旋蒸至干收集甲醇洗脱液10ml甲醇洗脱进样

4、HPLC-MS/MS检测分析实验内容4.1血清样本的前处理（反相C18固相萃取柱萃取法）实验内容4.2实验确定皂苷单体HPLC-MS/MS检测分析条件液相色谱条件：ZorbaxSB-C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）；流速：1.0mL/min；进样量：20μl；柱温：30℃；流动相：A：乙腈，B：0.1%磷酸水溶液；梯度模式：时间梯度：0→5→30→35min浓度梯度：30%→30%→50%→30%溶剂A质谱条件：电喷雾离子化，负离子模式检测；进入质谱流动相分流至0.5mL/min；细管电压3.0kV；锥孔电压35V；离子源温度80℃；干燥气温

5、度150℃；质量扫描范围m/z200～2000；雾化气（N2）流速15L/h；干燥气（N2）流速11.0L/h；EA单体MRM模式检测m/z=591.4。实验结果1、高剂量皂苷单体EA消化吸收曲线实验初步确定高剂量及低剂量皂苷单体EA的消化吸收曲线，如下：实验结果2、低剂量皂苷单体EA消化吸收曲线实验结果3、血清皂苷单体EA的液质分析方法回收率检验取空白血清，加入一定浓度的标准品，使血清中EA的浓度分别为0.6μg/mL、10μg/mL、20μg/mL，用测定样品的方法对标准品进行检测，测定方法回收率为89.4%，95.7%，92.4%，证明该分析方法准确

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