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时间:2020-09-14
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1、月季组织培养培养意义实验原理实验步骤1:初代培养2:继代培养问题与讨论常见品种月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物,每年多次开花,而且香味怡人,在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广,适应性强,栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉,古今中外文人墨客咏叹月季的佳作,不胜枚举。但品种比较单一,更新换代缓慢。随着组织培养技术的应用成功培育了大量优质月季组培苗,填补了市场空白,对加速新老品种更新换代,迅速普及名优新品种起到了重要作用。培养意义实验原理细胞的全能性:细胞具有全套遗传物质。能够发育成完整植株的能力。激素调控理论:当细胞分裂素和生长素的比值大时,诱导芽的产生;当比值小时,诱导根
2、的产生;一样时,诱导愈伤组织的形成。实验步骤(一)无菌培养的建立(1)选材选取生长健壮的当年生枝条,用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好,因为接种后,中段芽第5天左右就能萌发,而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。(2)培养基的配制整个培养过程都可用MS培养基,诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可,每升用0.3~1.Omg。MS培养基MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此,一般情况下,不用再添加氨基酸、酪
3、蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的显著特点。(3)清洗外植体 采回的枝条切去叶,再剥去附在茎上的叶柄及皮刺,先整段用洗衣粉水仔细刷洗,再用自来水冲洗,毛巾擦干后,放置在小木板上,用刀切成2~3厘米一段,每段至少一个侧芽,装入消毒过的培养皿,放在超净工作台上。(4)消毒与接种 在超净工作台上,用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25~30分钟,用无菌水涮洗数次,无菌纱布吸干茎段外表水分,按无菌操作要求接种,从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2~3周。(5)培养培养温度21℃最好,最高不超过25℃,有昼夜温差,光
4、照10~12小时/天,光强800~1200LX(勒克斯)。继代培养(1)将上述无菌芽从原茎段上切下,转接到MS+BA1-2mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.01-0.1mg/l的培养基上,促使嫩茎长出更多的侧芽,原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克(2)5周后,所培育的月季成倍的增加。(3)每5~6周做一次继代增殖,继代前先制备好培养基,然后在无菌操作条件下,将月季嫩茎切成1~2节一段,投入新鲜的增殖培养基上,月季小苗就会按几何级数增殖起来,也可以将大苗转入到生根培养基上。(4)壮苗培养①对增殖倍率高的品种,所增殖的嫩茎很细弱,要求进行一
5、次壮苗培养,以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为:MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1,如果并不特别强调繁殖速度,也可以一直使用这种培养基,以壮苗为主,增殖为辅,使增殖与壮苗合为一步。②培养条件。光照10~12小时/天,光强800~1800LX,温度20~23℃,最高24~26℃。(5)生根与移栽月季嫩芽生长到一定长度时,就应切割下来,转入生根培养基。切下的嫩芽长度以2~3厘米为宜,让幼苗基部伤口愈合,已长出根原基,幼根尚未长出,即出瓶种植。这种方法不会损伤根系,移栽速度快,成活率高。(a)以MS培养基为基础,配方为MS+NAA0.5,此外加入300mg/L活
6、性炭,30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎,经2周左右出现根原基,幼根尚未长出即出瓶种植。移植操作(b)移栽。幼苗出瓶后,先洗去沾附的琼脂培养基,再种植到粗沙+园田土(1:3)介质中,总的原则是疏松透气,有一定的保水、保肥能力。种植密度2~3厘米×4~6厘米/株,移栽完毕浇透水,并用0.1%的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗,能显著提高成活率。(c)移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85%以上,在温室、拱棚中移栽,覆好遮荫网,一般成活率都比较高,并注意通风和温度管理。4~6周后,须做好第二次移植,通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中,每杯种1苗,再经4~6周,地上、地下部分都充分生长,
7、有些植株还能开花。(d)移栽后植保工作。首次移栽1周后,可少量的追肥,视苗大小,浓度逐渐由0.1%提高到0.3%左右,施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾,MS培养液等,通常每7~10天喷一次杀菌剂,如百菌清等保苗,也可结合喷药施肥,以减少管理用工。试管苗第二次移栽后,管理上仍不可放松,须注意除草、施肥、防治病虫害,及时掐去顶芽,尤其是花蕾,以促进侧芽的生长,促使早日壮大。培养中易出现的问题初代培养外植体的褐变:褐变是由于植物组织中的多酚氧化酶被
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