临床免疫检验质量保证ppt课件.ppt

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1、临床免疫检验质量保证卫生部临床检验中心李金明定义质量保证(QualityAssurance,QA)为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。室内质量控制（InternalQualityControl,IQC)由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。定义室间质量评价（ExternalQualityAssessment,EQA）为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，

2、连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA用来为执业许可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力比对检验（Proficiencytesting,PT）。在以前的文献中，EQA常描述室间质量控制。临床实验室常规检验步骤标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、核酸扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价值。报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。质量保证、室内质控和室间质评之间的关系临床免疫检验方法三大“标

3、记”免疫检验技术:荧光标记、放射性核素标记和酶标其它标记免疫测定技术：发光物标记、金标、元素标记等免疫沉淀和免疫凝集试验酶联免疫吸附试验（ELISA）影响ELISA测定的因素试剂盒的因素实验操作影响ELISA试剂盒质量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:纯化、合成和基因工程抗原抗体：多抗、单抗和基因工程抗体酶结合物：酶免疫测定的核心成份色原底物：OPD和TMB运输贮存酶免疫测定操作中的注意事项标本的收集、运送和保存试剂准备加样温育洗板显色比色结果判断结果报告及解释标本的收集最常用的标本：血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液。建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。标本采集时间、方

4、式、采集量、采集容器、预处理标本的保存用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。试剂准备从冰箱中取出的试剂，待温度与室温平衡后使用；所用蒸馏水或去离子水应保证质量。加样避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。温育常采用的温育温度有43℃、37℃、室温和4℃等。温育所需时间与温度成反比，即温育温度高，则所需时间相对较短。温育时，微孔板应置于水浴（浮于水面）或湿盒中，以使反应溶液的温度迅速与温室平衡。洗板每次温育后洗板是否彻底，与非特异背景显色有很大关系。显色加入底物A和B后，应振荡混匀当底物为OPD时，显色反应应避光进行比色加酸终止显色反

5、应后，比色测定前应振荡混匀测定时，要注意酶标仪的波长是否已调至合适比较好的酶标仪可选择单波长或双波长比色测定，所谓双波长比色，即在敏感波长（此时对所显色具最大光吸收）如450nm和非敏感波长（所测得的光吸收为微孔板上的划痕、污迹以及指纹等所致），最后从仪器得到的读数为在敏感波长测得的吸光度与非敏感波长测得的吸光度之差。结果判断按照试剂盒确定的Cut-off值判断结果ELISA测定的“灰区”（可疑结果的含义）定性酶免疫测定的CUT-OFF值临床免疫检验中存在的问题临床免疫检验的标准化问题临床免疫检验的室内质控问题临床免疫检验项目的滥用问题临床免疫检验的标准化问题临床免疫检验标准化的一般原则

6、（1）标准品和质控品（2）参考方法标准品和质控品（1）可提供标准品的国际标准化组织有：WHO生物学标准化专家委员会（ECBS）、英国国家生物学标准和质控物研究所(NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl,NIBSC)、美国CDC和CAP、国家卫生研究所（NIH）、IFCC等；国内有中国药品生物制品检定所、卫生部临床检验中心标准品和质控品（2）在美国免疫检验试剂方法用于临床必须有FDA批准；在德国监督机构为INSTAND；在国内试剂批准文号由SFDA负责。仅使用标准品并不能保证免疫测定结果的可比性，但其在保证免疫测定质量中的重要性却

7、是不可替代的。标准品和质控品（3）标准品和质控品的功能:可用作临床检测的校准物;可用来评价试验的有效性;作为室内质控样本;作为室间质评样本.标准品分级:可分为第一,第二和第三等三个等级.一级标准数量有限,可使用10-20年,是冻干品,内含载体蛋白.一级标准可用来校准第二和第三级标准.国际标准品(IS)中作为第一级标准,二级标准可用来维持校准.标准品和质控品（4）对适用于免疫测定的标准品的一般要求要求一级标准二级标准三级标准来源单一多