中药鉴定学f上课讲义.pptx

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1、中药鉴定学的新技术与新方法汪哲宇钟隆洁吴佳佳2016.10.14Question1研究和鉴定中药的品种和质量，制定中药质量标准，寻找和扩大新药源的一门应用学科。什么是中药鉴定学？2保证患者用药的安全、有效寻找与扩大新药源为什么要进行中药鉴定？3传统方法：基源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定新技术与新方法：分子鉴定技术、性状显微鉴定技术等如何进行中药鉴定？分子鉴定技术分子鉴定技术核酸分子鉴定蛋白质分子鉴定基于序列分析抗血清鉴定飞行时间质谱鉴定电泳鉴定同工酶鉴定直接测序基于PCR基于分子杂交PCR-RFLP条形码技术位点特异

2、性PCRRAPDAFLPSCARSSRRFLPDNA芯片分子鉴定技术分子鉴定技术1.DNA条形码鉴定技术定义：生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段。DNA条形码鉴定技术在中药鉴定中的应用以ITS2序列为核心、psbA-trnH为补充序列的DNA条形码鉴定体系植物以COI序列为核心、ITS2为补充序列的DNA条形码鉴定体系动物DNA条形码鉴定技术信息量大且相对稳定ITS2序列（internaltranscribedspacer2）1鉴定速度快，可批量鉴定2对鉴定材料要求较低3分子鉴定技

3、术2.位点特异性PCR鉴定技术待鉴定种（变异性位点一）伪混品（变异性位点二）3’3’3’3’5’5’5’5’3’3’5’5’3’5’3’3’5’5’3’5’引物引物PCRPCR可扩增不可扩增位点特异性PCR鉴定技术关键点获得种内稳定的碱基变异位点1鉴定引物的设计2在中药鉴定中的应用流苏石斛蕲蛇东方泽泻分子鉴定技术3.序列特异性扩增鉴定技术（SCAR）a.RAPD标记分析b.RAPD特异片段回收、克隆及测序c.SCAR标记的建立3’3’5’5’3’3’5’5’AB随机引物PCR扩增聚类分析A类B类进一步筛选特异性条带F300

4、3’5’5’3’克隆，测序回收TTCAGGGCAC设计特异引物5’3’对A和B进行扩增3’3’5’5’A5’3’3’3’5’5’B5’3’可扩增不可扩增RAPD标记成功转化为SCAR标记参考文献[1]王川易、郭宝林、肖培根.中药分子鉴定方法评述[J].中国中药杂志,2011,36(3):237-240.[2]陈士林、郭宝林、张贵君等.中药鉴定学新技术新方法研究进展[J].中国中药杂志,2012,37(8):1043-1045.[3]费希同、巨苗苗、林源等.ITS2序列在植物DNA条形码鉴定中的应用[J].亚热带植物科学,2

5、014,43(4):339-342.[4]田孟良、官宇、刘帆等.基于RAPD标记的SCAR分子标记技术鉴定川牛膝及其混淆品[J].中国中药杂志,2010,35(8):953-955.[5]LiXX,DingXY,ChuBH,etal.MolecularauthenticationofAlismaorientalebyPCR-RFLPandARMS[J].PlantaMed,2007,73(1):67.[6]LuS,DingXY,HanL,etal.ConfirmingthegeneticidentityofDendrobi

6、umfimbriatumusinganAmplicationRefractoryMutationSystems(ARMS)[J].PIMolBiolRep,2010,doi:10.1007/s11105-010-0190-4..化学鉴定技术化学鉴定技术光谱鉴定技术色谱鉴定技术红外光谱鉴定技术HPLC鉴定技术GC鉴定技术HPCE鉴定技术拉曼光谱鉴定技术X-射线衍射图谱鉴定技术化学鉴定技术色谱

7、光谱联用HPLC-MS鉴定技术其它色谱-光谱联用技术光谱鉴定技术1.红外光谱鉴定技术原理：不同的化学键或官能团吸收频率不同，在红外光谱

8、上将处于不同位置，可获得分子中化学键或官能团的信息近红外区(0.75~2.5μm)、中红外区(2.5~25μm)和远红外区(25~300μm)化学鉴定技术123123优势局限性存在谱图影响因素多、背景复杂、谱峰重叠等限制近缘物种可能在图谱总体特征上变化较小不同的采收、加工、处理等可能较大影响药材总体成分变化仪器通用，操作简便，成本低，无污染，重复性好实现各种形态样品的快速、无损检测，样品可无需分离提取等预处理反映样品的整体化学信息光谱鉴定技术2.拉曼光谱鉴定技术原理：对与入射光频率不同的散射光谱进行分析以得到分子振动、转动

9、方面信息，并应用于分子结构研究的一种分析方法。八角茴香及其伪品的拉曼谱八角茴香莽草光谱鉴定技术3.X-射线衍射图谱鉴定技术原理：X-射线衍射图谱为X-射线受到原子核外电子的散射而发生的衍射，而不同原子排列的晶体会产生特定的衍射图像(图谱)，一般用于推测晶体结构。中药材的X-衍射图谱应为其所含各种成分中所