蛋白质药物聚乙二醇修饰技术简介ppt课件.ppt

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1、工作总结及QC岗位技能学习汇报人：刘彬彬华侨大学生物化工硕士1药物合成工作总结药物聚乙二醇修饰技术及质量控制化工原料及产品分析方法建立步骤010203目录CONTENTS202聚乙二醇修饰技术及质量控制3蛋白质药物聚乙二醇化意义4聚乙二醇修饰时应注意的问题修饰剂的水解稳定性和反应活性；蛋白质的修饰位点，修饰剂与蛋白质上的残基之间的反应类型和专一性；要求的修饰度；修饰剂与蛋白质的连接键的稳定性、毒性、抗原性；修饰后是否易于分离、纯化；是否适于建立快速、方便的分析方法；修饰剂是否能够简便经济地合成或购买。5聚乙二醇修饰剂

2、质量控制应当考虑聚乙二醇修饰剂的端基取代率和纯度，药物修饰用的聚乙二醇修饰剂其端基取代率和纯度都要求至少在90%以上；要关注其分子量分布系数，应尽可能采用分散度窄的产品，目前建议分散度至少控制在1.10以内（1.05左右为佳）；应注意聚乙二醇修饰剂批间分子量的一致性，有时候分子量的批间差异对产品性能的影响甚至要大于分散度对产品性能的影响；要关注聚乙二醇修饰剂本身的稳定性，因为在贮存、分装和生产过程中，高温、氧化和潮解都可能使其活化基团失活，从而导致修饰效率大大降低。6常用分析仪器原理及使用基质辅助激光解析电离飞行时间

3、质谱（Maldi-Tof-MS）高效液相色谱（HPLC）气相色谱（GC）凝胶渗透色谱（GPC）紫外可见吸收光谱（UV）红外光谱（IR）QC实验室常用仪器:7Maldi-Tof质谱分析技术田中耕一（日本）约翰·贝内特·芬恩（美国）2002年诺贝尔化学奖发展对生物大分子进行鉴定和结构分析的方法，建立了软解析电离法对生物大分子进行质谱分析。8Maldi-Tof质谱原理Maldi-Tof中基质的作用Maldi-Tof质谱分析技术1、把样品分子彼此分开，削弱样品分子之间的作用力；2、基质吸收激光能量，并将部分能量传递给样品；3

4、、帮助样品离子化。9Maldi-Tof质谱应用检测糖蛋白10Maldi-Tof质谱应用检测核酸11Maldi-Tof质谱应用检测聚合物12Maldi-Tof质谱应用检测小分子药物Sample(exp.Mass=448.1Da).Matrix:DHB13Maldi-Tof质谱应用鉴定和分类微生物14高效液相色谱（HPLC）原理基本原理：溶于流动相（mobilephase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationaryphase）发生作用（吸附，分配，离子吸引，排阻，亲和）的大小，强弱不同，在固定相中滞留时间

5、不同，从而先后从固定相中流出。特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。15高效液相色谱（HPLC）系统组成16高效液相色谱（HPLC）系统组成17高效液相色谱（HPLC）流动相HPLC流动相类别：1、按流动相组成分：单组分和多组分；2、按极性分：极性、弱极性、非极性；3、按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱。梯度洗脱可提高柱效的方法1、除去柱上端固定相变色部分(约3mm左右)，再补充新的固定相。2、色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。3、采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍

6、于柱体积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。18仪器维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器进样器检测器19气相色谱（GC）原理图20气相色谱（GC）常见问题为什么程序升温可以更好的实现混合物的分离？恒温气相色谱的柱温恒定在试样平均沸点，如试样的沸程很宽，则低沸点组分因柱温太高而色谱峰窄，相互重叠，而高沸点组分又因柱温太低，洗出很慢，有些甚至不能洗出，如果采用程序升温，采用足够低的初始温度，低沸点组分最先洗出，得到很好分离，随着柱温升高，较高沸点的组分也能较快洗出，得到良好的峰形。气谱峰的拖尾与哪些

7、因素有关？如何消除？与载体、样品类型、进样量等因素有关。样品含脂肪烃、芳香烃、烯烃等成较弱的拖尾；含羟基、羧基的醇、酸等严重拖尾。进样量小，拖尾弱，进样量大，拖尾严重。应尽量减少进样量，形成衍生物以消除气谱峰的拖尾。21使用气相色谱（GC）注意事项综上所述，使用仪器时，应注意：1、样品要进行净化，提纯；2、进样量要控制在一定范围内；3、进样要迅速；4、柱温要控制在300℃以内，以免损害柱子。22凝胶渗透色谱（GPC）Waters1515型凝胶渗透色谱仪23凝胶渗透色谱（GPC）基本原理：凝胶渗透色谱是一种液相色谱，原

8、理是利用高分子溶液通过一根装填有凝胶的柱子，在柱中按分子大小进行分离。主要特点：操作简便快捷、进样量小；数据可靠且重现性好、自动化程度高等。应用领域：1、聚合物分子量及其分布；2、聚合物的支化度的测定；3、聚合物分级及其结构分析；4、高聚物中微量添加剂的分析；5、测定高聚物的绝对分子量。GPC仪的组成24分子量校正曲线(LogM-V曲线)GPC