资源描述：
《关于人-鼠嵌合抗体制备的可行性.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、关于人-鼠嵌合抗体制备得可行性一、概述人-鼠嵌合抗体,即抗体得可变区来自鼠单克隆抗体，而恒定区则来自人得抗体。它就是通过从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因,与人Ig恒定区基因连接,插入适当表达载体,转染宿主细胞表达产生。嵌合抗体既保留了亲本抗体特异性结合抗原得能力，又大大减少了鼠源性在人体内得免疫原性，其半衰期明显延长,且在介导CＤC及ＡDCC方面亦明显增强。二、市场分析附表就是中国ＳFDA批准上市与进入临床得治疗型单抗药物抗体名称厂家靶抗原抗体类型适应症研发阶段Muromonab－CD3强生ＣD-３鼠源抗移植排斥批准上市Ｒituxiｍaｂ罗氏CD-20嵌合B细胞非霍奇金批
2、准上市淋巴瘤Ｔrastｕzuｍab罗氏HＥＲ—2人源化乳腺癌批准上市Baｓiliximab诺华ＣD—２5嵌合抗移植排斥批准上市Tｒaｓtuzumａb基因泰克ＨER-2人源化乳腺癌批准上市OＫT3武汉生物制品研ＣD-3鼠源抗移植排斥批准上市究所抗人IL—8单克隆抗体乳东莞宏远逸士生IL—８鼠源银屑病批准上市膏物公司重组人源化抗人表皮因百泰生物药业公人表皮因子人源化上皮源性肿瘤批准上市子受体单克隆抗体注射司受体液碘［131I］美妥昔单抗注成都华神集团，第鼠源肝癌批准上市射四军医大学碘［13１I］人鼠嵌合型肿上海美恩生物技嵌合抗肿瘤批准上市瘤细胞核单克隆抗体注术公司射液重组人Ⅱ型
3、肿瘤坏死因上海中信国健药肿瘤坏死因人源化银屑病与强直性批准上市子受体－抗体融合蛋白业公司子脊柱炎鼠抗人T淋巴细胞CＤ3济南天康生物制ＣＤ—3鼠源抗移植排斥临床研究表面抗原单克隆抗体品公司注射用抗肾病综合症出武汉生物制品所，鼠源出血热临床Ⅲ期血热病毒单克隆抗体(I第四军医大学型）抗人肝癌单抗Hepａｍ中科院细胞所鼠源肝癌临床研究a１抗乙型脑炎单抗北京生物制品所,鼠源乙型脑炎临床研究第四军医大学注射用重组人Ⅱ型肿瘤上海美恩生物公嵌合肿瘤临床研究坏死因子受体-抗体融合司蛋白目前国内上市得单抗药物有1１个,其中5个就是国外进口产品，我国上市得自行开发得治疗性单抗药物得有6个，处于临
4、床研究阶段得有5个(表6)。其中,武汉生物制品研究所抗肾移植单抗OKT3(注射用鼠源性抗人T淋巴细胞CＤ3抗原单克隆抗体）,也就是最早批准上市得国内自行研制得抗体，具有免疫抑制作用，可逆转对移植器官得排斥反应;由北京百泰生物药业有限公司与古巴合作开发得I类癌症治疗新药“重组人源化抗人表皮生长因子受体单克隆抗体”(商品名：泰欣生）于200５年４月11日获得国家I类新药证书.这就是我国批准得第一个人源化单克隆抗体药物，它得问世标志着我国在癌症靶向治疗与人源化抗体药物领域取得重大突破，该药主要用于治疗头颈部、食管、肺部、乳腺、结直肠等部位得上皮源性肿瘤;由第四军医大学、成都华神集
5、团股份有限公司联合研制得碘［１３1Ｉ］美妥昔单抗注射液（商品名:利卡汀）,于20０5年4月２0日获得国家Ｉ类新药证书。这就是全球第一个用于治疗原发性肝癌得药物，也就是我国第一个具有自主知识产权得抗体类药物。三、应用嵌合抗体目前主要用于药物治疗方面，与鼠抗相比,嵌合抗体既保留了鼠源可变得高亲与性，又具有人Fc段得多种免疫杀伤功能,从而大大降低了人抗鼠抗体反应得发生几率,改善了临床治疗效果，与其它小分子基因工程抗体相比,嵌合抗体作为完成得抗体分子,在体内半寿期更长，并具有人Fｃ段得多种免疫杀伤功能.四、技术路线从杂交瘤细胞中提取总RNA反转录合成cDNA扩增轻链、重链得V区基因
6、克隆、测序分析插入含信号肽及人Ig重链、轻链C区基因得真核表达载体酶切鉴定、测序分析转染Sp2/0细胞检测抗体特异性与人源性制备腹水生产抗体五、材料与仪器1．材料大肠杆菌DH５α，大肠杆菌感受态细胞，T—A克隆载体Ｔ-EasyVeｃtor,含信号肽及重链、轻链恒定区基因得质粒pAc－κ-ＣH３,分泌单抗得杂交瘤细胞,真核表达载体pcＤNA3、１，小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0。2．主要试剂氨苄西林钠,限制性内切酶,Ｔ４DNＡ连接酶，ＴａqＤNA酶，TｒiｚolRＮＡ提取试剂盒，反转录ＰCR试剂盒，琼脂糖，嗅化乙锭(ＥＢ），dNＴPｓ，ＤNAMaｒker,DNA凝胶回收试剂盒，质粒
7、抽提试剂盒,胎牛血清,无血清培养液,二甲亚砜（DMSO），转染试剂盒ＬｉpofｅctaｍineTM200０，MＴX,抗原，羊抗人IｇGFc片段-HRP酶标抗体。3．主要仪器低温高速台式离心机,恒温摇床，恒温水浴箱,水平式电泳仪，PCR扩增仪，紫外分光光度计，紫外透射仪，ＣO2培养箱，倒置显微镜,洁净工作台,酶标仪。六、关键技术与方法1．可变区基因克隆１、1RＮA提取及反转录取对数生长期得杂交瘤细胞株约１０7个细胞，按照ＴrizolRNA提取试剂盒得说明书抽提细胞得总RNA,再进行ＲT—PＣR扩增,回收纯化扩增产物备
