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时间:2020-09-30
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1、选修3专题1 基因工程考点一基因工程的工具【核心知识通关】1.限制性核酸内切酶(限制酶):(1)来源:主要从_____生物中分离纯化而来。(2)功能:_____双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的____________断开。原核识别磷酸二酯键(3)识别序列的特点:呈现碱基互补对称,无论是奇数个碱基还是偶数个碱基,都可以找到一条_________,如,以_______为轴,两侧碱基互补对称,如以为轴,两侧碱基互补对称。中心轴线中心线(4)切割后末端的种类。2.DNA连接酶:常用类型___________连接酶_____连接酶来源大肠杆菌T4噬
2、菌体功能连接_________连接__________________结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的___________E·coliDNAT4DNA黏性末端黏性末端和平末端磷酸二酯键3.载体:双链环状限制酶标记基因(2)其他载体:λ噬菌体衍生物、___________等。(3)具备的条件。①能在宿主细胞内_________并大量复制。②有_________________切割位点,以便与外源基因连接。③具有特殊的_________,以便进行筛选。动植物病毒稳定保存一个至多个限制酶标记基因(4)作用。①作为_________,将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对
3、目的基因进行大量_____。运载工具复制【特别提醒】限制酶和DNA连接酶的关系(1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。(2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。(3)DNA连接酶起作用时,不需要模板。【思维拓展】与DNA有关的四种酶比较项目限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脱氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱基对间的氢键形成产物黏性末端或平末端形成重组DNA分子新的DNA分子形成单链DNA【高考模拟精练】1.(2012·全国卷)根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(1
4、)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有__________和__________。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是___________________。(3)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即________DNA连接酶和________DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是________,产物是________。若要在体外获得大量反转录产物,常采用_________技术。(5
5、)基因工程中除质粒外,_________和_________也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌,一般情况下,不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞,原因是_____________________________________________。【解题指南】解答本题需明确四点:(1)限制性内切酶的作用和特点。(2)DNA连接酶的种类。(3)运载体的类型。(4)受体细胞的选择原理。【解析】(1)当限制性内切酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时,产生的是黏性末端,而当限制性内切酶在它识别序列的中心轴线处切开时,产生的是平末端。(2)为使运载体与目的基因相连,
6、不同的限制性内切酶应该切出相同的黏性末端。(3)DNA连接酶根据其来源的不同分为两类,一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为E·coliDNA连接酶,另一类是从T4噬菌体中分离出来的,称为T4DNA连接酶。(4)反转录是指以RNA为模板在逆转录酶的作用下合成DNA的过程,可以在体外短时间内大量扩增DNA的技术叫PCR(多聚酶链式反应)。(5)基因工程中可以作为运载体的除质粒外,还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。(6)大肠杆菌细胞有细胞壁和细胞膜,能阻止质粒(外源DNA)等物质的进入,只能通过Ca2+处理细胞,使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)才能作
7、为受体细胞。答案:(1)黏性末端 平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同(3)E·coli T4(4)mRNA(或RNA) cDNA(或DNA) PCR(5)λ噬菌体的衍生物 动植物病毒(6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱【延伸探究】(1)若把平末端连接起来,应该选用什么酶?提示:T4DNA连接酶。(2)切割载体和目的基因的酶是否必须选择同一种酶,原因是什么?提示:不必。只要两种酶切割产生的末端相同即可。2.(20
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