厌氧菌-食品微生物学ppt课件.ppt

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1、第八章微生物的生长繁殖及其控制生物个体由小到大的增长，即表现为细胞组分与结构在量方面的增加生长指生物个体数目的增加繁殖在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而且两者始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难以划清，因此实际上常用群体生长作为衡量微生物生长的指标。群体生长的实质是包含着个体细胞生长与繁殖交替进行的过程第一节微生物纯培养的获得平板划线分离法稀释倒平板法单孢子或单细胞分离法利用选择性培养基分离法1.平板划线分离法用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其

2、他形式的连续划线，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。2.稀释倒平板法3.单孢子或单细胞分离法采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移到合适的培养基进行培养。4.选择性培养基分离法各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长

3、的选择培养基，用它来培养微生物以获得纯培养。微生物纯培养分离方法的比较分离方法应用范围平皿划线法方法简便，多用于分离细菌稀释倒平皿法即可定性，又可定量，用途广泛单细胞挑取法局限于高度专业化的科学研究利用选择培养基法适用于分离某些生理类型较特殊的微生物第二节微生物生长量的测定评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果；客观地反映微生物生长的规律；评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响；微生物生长微生物生长测量方法个体计数法重量法生理指标法1、个体计数法（1）直接计数法借助显微镜观察

4、测定优点：快速提问:有哪些缺点?缺点：不能区分细菌的死活。方法：a.涂片染色法b.计数器(血球计数板）测定法c.比例计数法d比浊计数法450~650nm（2）间接计数法(活菌计数法)提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？活菌可以繁殖提问：细菌繁殖的可见现象是什么？产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养）计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌.缺点：慢分固体培养法和液体培养法无菌水A.稀释平板计数法—固体培养法第一步：菌样巧妙稀释得到不同稀释度（10-x）菌液菌样被

5、无菌水不同稀释倍率后平板培养图10-210-310-410-5各取1ml，均匀涂布于冷固体培养基平板上或与温热液态固体培养基混合冷却。第三步：培养稀释度过低，菌落密集无法计数可以计数，但数量过多，费时费力数量合适，作为结果数量太少，误差因素太大，不做计数第二步：接种平板每一个细菌会生成一个菌落一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。第四步：计数细菌数量=？细菌数量=数出的菌落数/稀释度例如：10-5稀释度时菌落数为125个细菌数量=125/10-5=1.25×107个/mL平板计数法是

6、采用最广的一种活菌计数法如国标法水中细菌总数的测定。注意：作空白及取平行样（2～3组）均值减小误差平均B.稀释液体计数法特点：液体培养、统计学查表计数又称MPN法（或最可能数法）MostProbableNumber例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧培养箱）对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行深层隔氧液体培养，按MPN法进行计数。332010-410-510-6310-10-210-310-4

7、10-5（a）稀释（b）稀释接种样品在液体表面加一层无菌液体石蜡隔绝氧气，恒温37℃培养14天记录变黑的试管情况（c）培养1ml+9ml培养基稀释程度、取样概率(d)统计－查表－计算根据不同稀释度变黑试管①统计出数量指标三位数及其中最低稀释度（取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管数，为第一位数字，后面两个稀释度的生长管数为后两位数）提问：上例情况而言统计数量是几？②查表表——MPN表32010-4MPN三管法测数统计表水中大肠菌群、铁细菌、硝化菌、亚硝化菌也用这种方法进行数量统计。个菌/毫升细

8、菌最可能数——通过其他精确的计数法，确定的各种数量指标时细菌数量的最可能值上面例子中数量指标“320”对应的细菌最可能数为9.5个菌/毫升，最低稀释度为10-4，折算出样品中菌浓度为？个菌/毫升。c.薄膜计数法薄膜——微孔滤膜（φ0.45um）（b）滤膜培养膜有菌面冲上原理——膜抽滤（细菌浓缩）+膜平板培养+计数（a）抽滤（滤器及膜事先灭菌）（c）统计计数提问：假如测出250个菌落，抽滤了50ml自来水，自来水中菌浓度是多少呢？250÷50ml=5个/ml自来水样品中的细菌数量=菌落数÷抽滤样品