基于独特型-抗独特型初步建立玉米赤霉烯酮无毒ELISA定量检测技术-论文.pdf

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1、基蒸笠垄王垫壁型：壁型生堡童壶重缢酮无毒ELISA定量检测技术第12期·13l7·doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2013．12．020基于独特型一抗独特型初步建立玉米赤霉烯酮无毒ELISA定量检测技术①宋其芳向军俭骆敏儿钟娜黄婉君贾彦琼王宏(暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室．广州510632)中国图书分类号R392．11文献标识码A文章编号1000-484X(2013)12．1317-05[摘要]目的：初步建立以玉米赤霉烯酮(ZEN)抗独特型单抗替代玉米赤霉烯酮标准品，检测ZEN残

2、留的无毒ELISA定量检测技术。方法：以ZEN—BSA为包被原，ZEN单抗(1c4)为反应抗体，分别以不同浓度的ZEN毒素或ZEN抗独特型单抗1D5(Ab213—1D5)为竞争物，建立竞争抑制曲线。根据抑制率在20％一80％问，在相同抑制率条件下，ZEN与1D5间浓度对应关系，绘制替代标准曲线及对应的浓度转换方程。以ZEN类似毒素代替ZEN作为竞争抗原，检验方法的特异性；板内、板问试验检验方法的精密度。结果：初步建立了ZEN无毒ELISA定量检测技术，1D5与ZEN毒素之间的替代标准曲线方程为：y：1．2846x(Y为

3、ZEN毒素浓度ng／ml，x为抗独特型抗体浓度(g／m1)。检出限(Ic。)为1．041ng／ml，检测范围为1．041～25．99ng／ml。方法的批内平均变异系数为3．88％，批间平均变异系数为4．96％。方法特异性好，与ZEN类似毒素几乎无交叉反应。结论：利用ZEN单抗和ZEN抗独特型单抗初步建立了ZEN的无毒ELISA定量检测方法[关键词]玉米赤霉烯酮；单克隆抗体；抗独特型单抗；无毒ELISA检测法DevelopmentofNon-toxicELISAquantitativedetectingtechnique

4、forZearalenonebasedonidiotype--anti-·idiotypereactionsSONGQi—Fang，XIANGJun—Jian，LUOMin-Er，ZHONGNa，HUANGWan—Jun，JIAYang—Qiong，WANGHong．KeyLaboratoryofImmunologyandAntibodyCenterofGuangdongProvince，JinanINive~it)，GuangzbOU510632，China[Abstract]Objective：Todevelopa

5、non—toxicELISAquantitativedetectingtechniqueofzearalenone(ZEN)，8monoclonalan·ti-idiotypeantibody(AidorAb2)againstzearalenonewasusedtoreplaceZENtoxinstandard．Methods：ZEN—BSAascoatinganti—gen，anti-ZENmonoclonalantibody(mAb)1G4asreactingantibodyanddifferentconcentr

6、ationsofZENtoxinsorthemonoclonalanti-idiotypeantibodiesofZEN1D5(Aid—p一1D5)ascompetingreactants，thestandardinhibilioncurveofbothwereobtained．Duringtheinhibitionbetween20％一80％andunderthesameinhibitionrate，therelativitybetweenZENandAid—p一1D5wasanalyzedandthereplace

7、mentequationbetween1D5andZENstandardwasbased．Thespecificity，intra—plateandinter—wellassayvariationswereiden-tifed．Results：ThequantitativeconversionformulabetweenZENand1D5was：Y=1．2846x”，(Y：concentrationofZENng／ml，x：concentrationof1D5m1)．Thelowestdeterminedlimitwa

8、sapproximately1．041rig／mlandthedetectionrangewas1．041～25．99ng／m1．Theintra—plateandinter—wellvariationwere3．88％and4．96％respectively．Thecross—reactionrateswiththesimila