资源描述：
《极耐热性--葡萄糖醛酸酶的高效表达和酶学性质及其 应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、眉题2极耐热性b-葡萄糖醛酸酶的高效表达和酶学性质及其应用王卓1#,裴建军1#,李华钟1,邵蔚蓝1,21江南大学生物工程学院,无锡2141222南京师范大学生命科学学院,南京210046摘要:从海栖热袍菌克隆出编码热稳定性b-葡萄糖醛酸酶基因,以热激载体pHsh为表达质粒,在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过一步热处理后,酶纯度达电泳均一。纯化重组酶酶学性质研究表明,b-葡萄糖醛酸酶的最适反应温度为80oC,最适反应pH为5.0,pH5.8~8.2之间酶的稳定性较好,80oC的半衰期为2h,SDS-PAGE结果显示分子量
2、为65.9kD,与理论推算值相吻合。以对硝基苯-b-葡萄糖醛酸苷(pNPG)为底物时,其动力学参数Km值0.18mmol/L,Vmax值为312u/mg。初步的应用分析表明,该重组酶能催化甘草酸转化为甘草次酸。关键词:b-葡萄糖醛酸酶,甘草酸,甘草次酸Expression,CharacterizationandApplicationofThermostableb-glucuronidasefromThermotogamaritimaZhuoWang1#,JianjunPei1#,HuazhongLi1,andWeilanSha
3、o1,21SchoolofBiotechnology,JiangnanUniversity,Wuxi214122,China2DepartmentofLifeSciences,NanjingNormalUniversity,Nanjing210046,ChinaAbstract:Thegeneofb-glucuronidasefromThermotogamaritimawasclonedintotheplasmidpHsh,andexpressedinEscherichiacoliJM109.Therecombinantpro
4、teinwaspurifiedtohomogeneitybyasimplestep,heattreatment.Therecombinantenzymehadamolecularmassof65.9kD.Theoptimalactivityofb-glucuronidasewasfoundatpH5.0and80oC.ThepurifiedenzymewasstableoverapHrangefrom5.8to8.2andhadahalflifeof2hat80oC.Thekineticexperimentsat80oCwit
5、hp-nitrophenyl-b-glucuronideassubstrategaveaKmandVmaxof0.18mmol/Land312upermgofprotein.Thepurifiedenzymecouldtransformglycyrrhizintoglycyrrhetinicacid.Keywords:b-glucuronidase,glycyrrhizin,glycyrrhetinJournals.im.ac.cn王卓等:极耐热性b-葡萄糖醛酸酶的高效表达和酶学性质及其应用1413甘草属于豆科植物,具有明显的
6、抗炎,抗溃疡作用和抗变态反应作用;近年的药理研究发现甘草还具抗肿瘤,抗爱滋病毒的活性。大量研究证明,Journals.im.ac.cn王卓等:极耐热性b-葡萄糖醛酸酶的高效表达和酶学性质及其应用1413上述作用主要归因于甘草的主要成分甘草酸和甘草次酸及其衍生物[1-4]。甘草酸(Glycyrrhizin,GL)属于三萜类皂甙,在C3位连接2个葡萄糖醛酸。研究表明,甘草酸的糖链对其生理功能有着重要影响[5]。如果去掉甘草酸的2个葡萄糖醛酸,则生成甘草次酸(Glycyrrhetinicacid,GA),抗炎,免疫调节,抗肝损伤,抗
7、病毒,抗肿瘤等生理活性增强。如果去掉甘草酸的1个葡萄糖醛酸,则生成单葡萄糖醛酸甘草次酸(Glycyrrhetinicacidmonoglucuronide,GAMG),其甜度为蔗糖的1000倍,并有可能会去除甘草酸排钾阻钠的副作用[6]。有研究发现,b-葡萄糖醛酸酶能催化甘草酸生成甘草次酸或者单葡萄糖醛酸甘草次酸,不同来源的酶在降解特性上有一定的差异[7]。由于b-葡萄糖醛酸酶在工业催化中的应用潜力,对于它的研究近年来成为一个热点。作为药物制备中使用的催化剂,人们期望所用的酶具有很好的纯度、反应过程中不需要防腐,极耐热性酶在制
8、备和应用中易于满足这些要求。虽然已经在许多微生物中发现有b-葡萄糖醛酸酶,并且有些已经对它的酶学性质进行了研究[8]。但是,目前已报道的热稳定性b-葡萄糖醛酸酶并不多。海栖热袍菌(Thermotogamaritima)是一种生长在55~90oC的海底火山口附近、严格厌氧的细菌
