植物组织中叶绿素含量测定.docx

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1、植物组织中叶绿素含量测定（无机及分析化学实验II-设计性实验）一、实验目的1．设计用分光光度计测定植物组织中的叶绿素2.学习利用文献资料设计研究方案3.掌握分光光度计测定植物组织中的叶绿素的原理与方法二、原理：叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种，均易溶于乙醇、乙醚、酒精和氯仿。叶绿素a叶绿素b叶

2、绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm，且两吸收曲线相交于652nm处。叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，可在663nm和645nm测定试样吸光度（两组份混合试样测定，双波长法），根据Lambert－Beer定律，列出浓度c与吸光度A之间的关系式：A663＝82.04ca＋9.27cb…………………………………（1）A645＝16.75ca＋45.6cb…………………………………（2）（1）、（2）式中的A663、A645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的吸光度度。ca、cb为叶绿素a、b

3、的浓度，单位为g/L。82.04、9.27为叶绿素a、b在波长663nm时的比吸收系数16.75、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。解方程式（1）（2），则得经验公式：ca=12.7A663-2.69A645…………………………………（3）cb=22.9A645-4.68A663…………………………………（4）cT=（ca+cb）=20.2A645+8.02A663…………………（5）此时，cT为总叶绿素浓度，ca、cb为叶绿素a、b的浓度，单位为mg/L，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算a、

4、b总叶绿素的浓度。仪器：分光光度计、电子天平、棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光）、小漏斗、滤纸试剂：95%乙醇一、实验步骤1、试材的采集采集新鲜植株叶片（或含叶绿素的其他组织），夹于双层报纸中，风干（不能置于太阳光下晒）。将风干材料处理成细小颗粒，装入封口塑料袋，避光保存。2、待测液的制备（1）叶绿素的浸提精密称定风干后的样品（约0.1g）于20mL95%乙醇中，在室温浸提36-48h。（2）叶绿素浸提液定容提取液过滤到50mL棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光），用95%乙醇定容至50mL，摇匀，置于

5、暗处备用待测。3、测量吸光度取1cm的比色皿，注入上述叶绿素酒精溶液，用95%乙醇为参比液，1cm的比色皿为吸收池，分别在663nm和645nm波长测吸光度，每一波长读三次数，取平均值带入公式计算。如吸光度大于0.8，按倍数准确稀释（稀释倍数为n），尽量使吸光度的测量值在0.2-0.8范围内。4、结果计算用测得的吸光度A663、A645，代入（3）式计算溶液中叶绿素a的含量；代入（4）式中计算得到叶绿素b的含量，代入（5）式计算得到叶绿素总含量。计算植株中叶绿素含量时，需要考虑稀释因子。数据记录及处理：表1波长A1A2A

6、3A平均值663nmA663(平均值)=645nmA645(平均值)=表2cacbcTwT17周星期一、星期二（全天开放）采集新鲜树叶并把样品带到实验室来领塑料密封的试管，然后称量0.1g新鲜样品用研钵磨碎，并用少量酒精洗涤并转移到塑料密封试管，稀释到50mL的刻度，带回家避光保存，并于星期三，星期四（全天开放）带到实验室测定吸光度，并计算浓度含量，交实验报告批改后登记成绩。