半固态蔬菜发酵方法地研究.doc

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1、半固态蔬菜发酵方法的研究学生　常姣　　指导老师　燕平梅（师学院生物系，030031）摘要:为了探明矮花叶基因插入玉米植株后，其在萌发过程中某些生理生化指标的变化，以及其是否影响亲本玉米自身的代产物的含量。本试验以转基因矮花叶玉米种子为材料，测定其发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数；芽期淀粉酶、蛋白酶活性和可溶性糖、可溶性蛋白含量以及苗期过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和叶绿素含量的变化。结果显示：转基因矮花叶玉米上述物质的活性或含量均高于对照转基因玉米，表明外源基因的导入没有影响上述物质的合成和代。关键词:转基因矮花叶玉米发芽指

2、标酶活力玉米为粮、饲兼用的主要作物之一，在世界农业生产上有着举足轻重的地位。我国为世界第二大玉米生产国，对玉米的需求与日俱增[1]。然而玉米在生长期间容易受多种病虫害的严重危害而使其产量和品质下降，特别是受各种病毒侵染造成病毒性退化。全世界有40多种病毒侵染玉米，其中以玉米矮花叶病毒(MaizeDwarfMosaicViurs)分布最广，危害最严重[2]。利用基因工程手段，可选育出转基因矮花叶玉米品种，改善玉米抗矮花叶病的能力。如小红等利用基因枪法将玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因(MDMVCP)导入玉米优良自交系，后代对玉米矮花叶病呈现不同程度的抗性。转基因玉米所带来的优

3、势勿庸置疑，但其安全性一直都是人们关注的焦点。一是基因扩散造成基因污染问题。玉米是靠风力授粉，所以很容易授粉给非转基因作物，从而造成品种混杂。抗性转基因玉米还有可能将抗性基因转至环境中的野生植物群中，增加其抗虫、抗病毒、抗逆性，使其成为难以控制的杂草，甚至由于超强的适应性，有可能造成生态平衡的破坏。二是对人体健康造成影响的问题。标记基因(尤其是用抗生素基因作标记)可能会发生基因的“水平转移”，从而对人体产生负面影响，如抗生素抗性基因与人体病原物发生“异源重组”，则会降低抗生素在临床医疗过程中的有效程度。一些基因在转移过程中，有可能获得某些蛋白的合成指令，导致人体过敏反

4、应[1]。此外由于在转基因操作中对外源基因的插入位点尚无准确控制以及外源基因与植物基因组之间可能存在各种复杂的相互作用，可能会产生各种非预期效应，这些非预期效应可以引起植株代产物的含量和营养成分发生变化甚至会减少[3]。到目前为止，前人对转基因矮花叶玉米遗传和抗病性方面的研究不少[4]，但对其生理生化指标的研究报道较少。为了探明矮花叶基因插入玉米植株后，其在萌发过程中某些生理生化指标的变化，以及其是否影响亲本玉米自身的代产物的含量，为转基因矮花叶玉米的育种提供试验依据。本试验以转基因矮花叶玉米种子为材料，测定其发芽率、发芽势、发芽指数；淀粉酶、蛋白酶、CAT、POD、

5、SOD活性以及可溶性糖、可溶性蛋白和叶绿素含量的变化。1.材料与方法1.1试验材料抱头白1.2主要仪器设备人工气候培养箱：海尔特种电冰柜、风光光度计、鼓风干燥箱（FN101_1A型）：仪表厂、高速台式离心机（TGL_16B）、磁力加热搅拌器（HJ_1）：长城科工贸、电热恒温水浴锅：海尔特种电冰柜、电子天平（0.1mg）。1.3方法1.3.1蔬菜前期处理取100克白菜16份于透明熟料袋，做以下处理：预发酵1：先以8%食盐均匀涂与蔬菜表面腌制（三天）后将腌制菜洗（煮沸放凉的水）干净，沥干水分，涂上发酵辅料{1%（w/w）的食盐、1%（w/w）的白糖、1%（w/w）的虾酱、

6、3%（w/w）的辣椒粉、1%（w/w）的蒜、1%（w/w）的葱}，将塑料袋密封。预发酵2：先以8%食盐均匀涂与蔬菜表面腌制（三天）后将腌制菜洗（煮沸放凉的水）干净，沥干水分，涂上发酵辅料{1%（w/w）的食盐、1%（w/w）的白糖、1%（w/w）的虾酱、3%（w/w）的辣椒粉、1%（w/w）的蒜、1%（w/w）的葱、30%（w/w）的淀粉糊}，将塑料袋密封。直接发酵1：直接在蔬菜表面涂上发酵辅料{10%（w/w）的番茄酱、10%（w/w）的葡萄糖、20%（w/w）的虾酱、6%（w/w）的食盐}，将塑料袋密封。直接发酵2：直接在蔬菜表面涂上发酵辅料{10%（w/w）的番

7、茄酱、10%（w/w）的葡萄糖、20%（w/w）的虾酱、6%（w/w）的食盐、30%（w/w）的淀粉糊}，将塑料袋密封。两种发酵方法发酵一周、两周、三周、四周测定发酵蔬菜硝酸盐含量、亚硝酸盐含量、乳酸菌数量、大肠杆菌数量、PH、及发酵蔬菜的感官评价。1.3.2生理生化指标测定1.3.2.1泡菜中亚硝酸盐的测定准备称取4g试样，置于研钵中，研碎后用14mL水转移到50mL烧杯中，滴加2%NaOH溶液调节样品酸度至pH8，定量转移至50mL容量瓶中。滴加0.42mol/LZnSO4溶液约（0.6mL）混匀，至产生白沉淀。置60℃水浴中加热10min，取出