酶联免疫吸附测定法（elisa）在抗生素残留检测中的应用

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1、酶联免疫吸附测定法（ELISA)在抗生素残留检测中的应用药物残留快速检测试剂盒实验操作指导1、酶联免疫吸附测定法（ELISA）简介1.1、基本概念：抗原、抗体、抗原抗体的特性1.2、ELISA方法简介：1.3、ELISA方法的原理1.4、ELISA方法的分类2、ELISA试剂的组成2.1、ELISA试剂盒的组成2.1.1、已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂，俗称酶标板）；2.1.2、酶标记的抗原或抗体（酶标记物）；2.1.3、酶的底物；2.1.4、参考标准品（定量测定）；2.1.5、酶标记物及样本的稀释液；2.1.6、洗涤液；2.1.7、酶反应终止液。

2、2.2、各ELISA组成试剂的作用2.2.1、固相载体2.2.2、免疫吸附剂2.2.3、酶标记物2.2.4、酶的底物2.2.5、洗涤液2.2.6、反应终止液2.2.7、参考标准品3、ELISA实验过程3.1、试剂的准备3.2、加样3.3、保温3.4、洗涤3.5、显色和比色4、ELISA试验的质量控制4.1、分析前质控4.1.1、人员培训4.1.2、仪器质控4.1.3、标本采集及处理过程的质控4.2、分析中质控4.3、几种常用的质控方法4.3.1、灰区概念4.3.2、外添加回收率试验方法4.3.3、确证阳性样品质控4.3.4、室间质评的方法：发质控物进行调查5

3、、胶体金试纸5.1、免疫层析法简介及特点5.2、免疫层析法的结构及原理二、培训内容（操作部分）6、操作过程演示7、计算软件应用说明1、酶联免疫吸附测定法（ELISA）简介1.1、基本概念：抗原：抗原是指进入人或动物机体后，可刺激机体免疫系统发生免疫应答，从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。抗体：是由抗原刺激动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗原抗体的基本特性：a、反应的特异性；b、反应的等比例性1.2、ELISA方法简介：ELISA属于标记免疫学技术的一种，1971

4、年由荷兰和瑞典的学者提出，由于其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在食品安全和卫生检测中得到了广泛的应用。目前市场上有多种基于ELISA方法开发的用于食品中抗生素检测的试剂盒产品。返回1.3、ELISA方法的原理基于抗原抗体反应的特异性和等比例性，以96孔的聚苯乙烯塑料微孔板（又称酶标板）为载体，在适当的技术条件下使抗原或抗体包被（吸附）在酶标板微孔的内壁上成为所谓的包被（固相）抗体或抗原，没有被吸附（游离）的抗原或抗体通过洗涤除去，然后直接加入酶标记抗体或抗原（或先加入适当的抗体或抗原与包被抗原或抗体反应后，再加入相应的酶标记抗体或抗原），形成酶标记的抗

5、原—抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物洗涤去除，加入底物溶液于微孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化或还原成为有色的底物。在一定的条件下，复合物上酶的量（也反映了固定化的抗原抗体复合物的量）和酶产物呈现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量。这就是ELISA的原理。返回1.4、ELISA方法的分类ELISA可以分为直接法、间接法和夹心法等几种。直接法：直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗原—抗体复合物，加入酶反应底物，测定产物的吸光值，计算出包被在酶标上的抗体或抗原的量。见

6、图2-17（a）间接法：是将酶标记在二抗上，当抗体（一抗）和包被在酶标板的抗原结合形成复合后，再以酶标二抗和复合物结合，通过测定酶反应产物的颜色可以（间接）反应一抗和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量。见图2-17（b）夹心法：是先将未标记的抗体包被在酶标板上，用于捕获抗原，在用酶标的抗体与抗原反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物；也可以象间接法一样应用酶标二抗和抗体-抗原-抗体复合物结合，形成抗体-抗原-抗体-酶标二抗复合物，见图2-17（C）。前者称为直接夹心法，后者称为间接夹心法。返回ELISA原理及分类（图2-17）上述三种方法又可以分为竞争法和

7、非竞争法。由于我公司的试剂盒产品绝大部分属于直接法中的竞争法。下面对直接法中的酶标抗原竞争法作重点说明。在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定孔和对照孔，在对照孔中加入系列标准品溶液和酶标记物；在测定孔中同时加入酶标记物和非酶标抗原（通常来自于待测样品），酶标记物和样品互相竞争包被抗体的结合点，经过温浴后，没有结合到包被抗体上的酶标记物和样品经过洗涤去除。拍干后加入底物溶液，经温育后洗涤拍干，显色、终止，用酶标仪测定吸光度值。其反应原理如（图2-18）返回竞争法ELISA原理（图2-18）如图所示.在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测

8、定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液