麻风治愈者外周血中白介素-10及CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞的水平.pdf

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1、廛志2015年44卷第3期JClinDermato1，March2015Vo1．44．No．3147论著麻风治愈者外周血中白介素一1O及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的水平李彩霞．李晓岚，陆林，贾曼红，邹子宏，徐元品，王笑彬s，张晓虹z，李贤光·。周晓鸿(1．昆明医科大学附属延安医院皮肤科，云南昆明650051；2．云南省疾病预防控制中心体检中心，云南昆明650031：3．昆明市疾病预防控制中心麻风防治科，云南昆明650011；4．楚雄州疾病预防控制中心，云南楚雄651200：5．晋宁县疾病预防控制中心，云南昆明650

2、600；6．昆明医科大学第二附属医院皮肤科，云南昆明650032)[关键词】麻风；治愈者；白介素一10；调节性T细胞；免疫失衡【中图分类号】R755[文献标识码】B[文章编号]麻风是由麻风分枝杆菌感染引起的慢性传染病。抗人CD4抗体、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人主要侵犯皮肤和周围神经。大多数学者认为，麻风的CD25抗体、藻红荧光素(PE)标记的抗人Foxp3抗体、发病与转归与机体的免疫功能密切相关。麻风的有效同型对照FITC—mouseIgG1、PE—mouseIgG1、Human保护免疫(杀菌效果)取决于机体的细胞免疫功

3、能。TFoxp3BufferSet及缓冲液StainBufer(FBS)购自美国细胞和巨噬细胞是麻风的免疫基础。白介素(IL)一10Becton—Dickinson(B—D)公司。流式细胞仪为Beckman主要由单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞Coulter公司生产的EpicsXL型分泌，具有多种生物学活性，对机体的免疫活性和炎1．2．2IL一10检测采用流式细胞微球芯片捕获技术症过程具有重要调节作用。IL一1O能抑制T淋巴细胞(cytometricbeadarray，简称CBA)检测麻风治愈组的激活及细胞因子的分泌。诱

4、导T淋巴细胞免疫耐和正常对照组血清IL一10的水平。受，抑制抗体依赖性T淋巴细胞的增生。与CD4+CD25+1．2．3血液采集取被检测者肘静脉血4mL于普通Foxp3调节性T细胞的功能密切相关。真空采血管中．室温下静置2h，3000r／min离心10前期的研究工作中，我们发现麻风治愈者外周血min后收取上层血清，置于EP管中一20冻存。CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞明显高于正常人【1-2]。为1．2．4绘制标准曲线先将试剂盒内的细胞因子标准进一步了解麻风治愈者机体的免疫状况。探讨麻风的品按照梯度法稀释为1：1、1：2、1

5、：4、1：8，1：16、1：32、1：64、发病机制，我们对云南省楚雄州双柏县麻风村麻风治1：128和1：256几种浓度。然后加入空白对照管制备标愈者血清IL一10及外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T准曲线(图1)。细胞的水平进行了检测，并分析它们之间的关系。1．2．5样本制备。获取数据在12x75mmFALCON上样管中各加入50mL捕获微球混悬液，混匀；各管1病例与方法加入50的IL一1OPE信号抗体；各管加入50L检1．1病例资料测样本；室温避光孵育3h；各管加入1mL洗液，1500麻风治愈组26例，来源于云南省楚

6、雄州双柏县r／min，离心5min，洗涤1次；各管加入300IxL洗液，麻风村，为已治愈的麻风患者。其中男18例，女8例，重新悬浮微球：上机前充分混匀3—5S，用流式细胞仪年龄46～82岁，平均(66．31_+10．36)岁。对照组56例，分析样本。使用Ce11Quest软件获取样本数据，使用为本院健康体检人群，其中男34例。女22例，平均BDCBA软件分析结果。(38．00_10．36)岁。血清学及肝肾功能检查正常，排除1．2．6流式细胞仪检测调节性T细胞取一流式试感染结核、麻风、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒管，力Ⅱ入F

7、ITCanti—humanCD4／PE，anti—humanCD25(HCV)、肿瘤及患自身免疫系统疾病的人群。mAb／AF647，anti—humanCD127各2L，再力Ⅱ100IxL1．2方法新鲜肝素抗凝血，混匀，避光孵育20min，然后加入11．2．1仪器和试剂IL一10检测试剂盒、PerCP标记的mL溶血素溶血，避光放置5min，以2mLI~PBS洗涤2次，上流式细胞仪进行检测。1．3统计学方法采用SPSS19．0软件包进行统计学分析。经检验，收稿日期：2013—12—17；修回日期：2014—07—18数据满足正态性和

8、方差齐性条件，两组数据比较采用