抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者肝细胞cccDNA水平的研究-论文.pdf

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1、山西医药杂志2014年7月第43卷第l3期ShanxiMedJ，July2014，Vo1．43，No．13参考文献[3]Soezajp，PapinelliMA，AmaralE，eta1．ObstetriccareandseEli卢运萍，林善群．剖官产3587例原因分析[J]．中国医药指南，vereprenancycomplicationsinLatinAmericaandtheCaribbe—2012，10(6)：179-18O．an：ananalysisofinformationfromdemographichealthsurveys[2]BetrainAP，

2、MerialdiM，LauerJA，eta1．Ratesofcaesarean[J]．RevPanamSaludPublica，2007，21(6)：396．section：analysisofglobal，regionalandnationalestimates[J]．(收稿El期：2014-03—15)PaediatrPerinatEpidemiol，2007，21(2)：98．抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者肝细胞cccDNA水平的研究代秀芳陈小丽施晓莉阮鹏乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行。剂盒检测8一珠蛋白DNA(看家基因)来计算肝组HBVcccDNA是

3、HBV复制的原始模板，目前抗病织细胞数目，肝组织cccDNA水平以拷贝／细胞来毒治疗药物无法直接清除肝细胞内cccDNA，导致表示。其持续存在肝细胞核内，成为肝炎迁移不愈和复发1．3血浆和肝组织HBV总DNA(tDNA)检测：的根源[1]。本研究对接受抗病毒治疗后的慢性乙肝组织样本收集当天同时收集血清标本并放型肝炎患者肝细胞cccDNA水平进行检测，现报告一20℃冰箱备用。采用QIAampDNABloodMini如下。试剂盒(Qiagen)提取血清DNA，采用Roche公司1资料和方法CobasTaqManHBV检测试剂盒RT—PCR法检测1．1病例选择：201

4、2年6月至2013年12月于我血清和肝组织HBVtDNA(PSAD消化前)水平。院就诊的46例接受单独核苷类药物(阿德福韦酯肝细胞HBVtDNA水平以拷贝／细胞来表示，计算口服，10mg／d或拉米夫定口服，100mg／d)或联合方法同肝细胞cccDNA。干扰素(100g，肌肉注射，每周1次)治疗至少半1．4血清HBsAg和HBeAg检测：血清HBsAg年的慢性乙性肝炎患者，21例为原发性治疗失败，和HBeAg水平采用雅培酶免疫法(EIA)检测，检其中3例为血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性患测灵敏度为0．05～250U／mL。HBsAg和HBeAg者；11例实

5、现持续病毒学反应_2]，其中6例为血清的阳性阈值分别为0．05U／mL、1．0U／mL，浓度HBeAg阴性患者；14例患者实现了持续病毒学反高于250U／mL的样本稀释至检测范围后进行检应和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)血清学转换，其中测。11例为血清HBeAg阴性患者。所有患者均采用11．5统计学处理：采用SPSS13．0软件进行统计S快速穿刺法进行肝组织活检，活检肝组织液氮冷分析。持续性变量用±S表示，并用Mann—Whit—ney分析进行检验。血浆HBsAg和HBeAg水平冻后立即放入一8O。C冰箱冻存。1．2肝细胞cccDNA水平检测：肝组织DNA通过(

6、U／mL)用对数值表示。采用Pearson相关分析及QIAampDNAMini试剂盒(Qiagen)从肝组织中提。检验，P<0．05为差异有统计学意义。2结果取出来。为提高cccDNA检测的特异性，在聚合酶2．1肝内HBVcccDNA和HBVtDNA定量检链反应(PCR)前用依赖ATP的内切酶(PSAD，测：表1为患者临床及血清学、病毒学特征。2l例Epicentre)来降解rcDNA和单链条状DNA。肝细原发性治疗失败、1O例实现持续病毒学反应和11胞cccDNA水平采用荧光定量PCR法(RT—PCR)例实现持续病毒学反应和HBsAg血清学转换的患检测l_3]

7、，对包含单体HBV的质粒进行10倍稀释作者肝细胞内可测到cccDNA；21例原发性治疗失为检测标准品。采用LightCyclercontrolDNA试败、11例实现持续病毒学反应和13例实现持续病作者单位：442000十堰，湖北医药学院附属人民医院甲毒学反应和HBsAg血清学转换的患者肝细胞内可乳外科测到tDNA。原发性治疗失败患者平均肝细胞通信作者：阮鹏cccDNA水平为4．18拷贝／细胞；实现持续病毒学山西医药杂志2014年7月第43卷第13期ShanxiMedJ，July2014，Vo1．43，No．13反应患者为0．039拷贝／细胞；实现持续性病毒学贝／

8、细胞)显著低于HBeAg