五味子乙素对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制-论文.pdf

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1、中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2014Apr；30(4)：523—7·523·网络出版时间：2014～3—2117：30网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20140321．1730．018．html五味子乙素对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制曹波，牛聪，卢涛，胡杰，陈虹(武警后勤学院1．救援医学系生药学教研室，天津300309；2．附属医院，天津300192；3．天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室，天津300309)doi：10．3

2、969／j．issn．1001—1978．2014．04．018好的UVB防护作用。在此基础上本文选择SchB作文献标志码：A文章编号：1001—1978(2014)04—0523—05为研究对象，探究其对UVB辐射诱导的HaCaT细中国图书分类号：R122．4；R284．1；R322．991；R329．25；胞凋亡的抑制作用及其机制。R394．21材料与方法摘要：目的研究五味子乙素(SchB)对中波紫外线(ultravi．1．1材料oletradiationb，UVB)辐射诱导人表皮角质永生化细胞1．1．1细胞株人永生化角质细胞HaCaT细胞购(HaCat)凋

3、亡的抑制及其作用。方法MTr法检测五味子自凯基生物技术有限公司。乙素(SchB)对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用；Hoechst染色检测细胞凋亡；RT．PCR检测SchB对HaCaT基1．1．2主要试剂和仪器五味子乙素(SchB)，由因表达的影响。结果SchB对HaCaT细胞生长未显示出抑本院生药学教研室陈虹教授研究室提供，分子质量制作用，且可以抑制由UVB辐射引起的细胞凋亡，并降低了400，白色结晶，难溶于水，纯度97％，体外实验用UVB诱导的053、021、Caspase一3等与凋亡有关基因的表达。DMSO配制。DMEM培养基(天润善达公司)，胎

4、牛结论SchB可通过降低紫外线辐射后细胞的凋亡基因的表血清(FBS)(中国医学科学院血研所科技公司)，溴达从而抑制UVB对皮肤细胞的损伤，发挥其抗光老化作用。化四氮唑蓝3-(4，5-dimethyhhiazol-2一y1)-2，5一di—phenyl—tetrazoliumBromide，MTr)、Hoechst33342、关键词：天然产物；五味子乙素(SchB)；人表皮角质永生化EB(溴化乙啶)(美国Sigma公司)，RT—PCR试剂盒细胞；UVB辐射；细胞凋亡；机制(大连宝生物资源有限公司)，OlympusIX70倒置显微镜(日本Olympus公司)，MOD

5、EL680型酶标仪由于各种因素导致大气臭氧层的不断破坏，致(意大利BIO．BAD公司)，uV一260型紫外一可见分使太阳紫外线辐射明显增强。紫外线按其波长的不光光度计(日本Shimadzu公司)。同可以分为4种，长波紫外线(UVA，320～4201．2方法nm)、中波紫外线(UVB，290～320nm)、短波紫外线1．2．1细胞培养人表皮角质永生化细胞HaCaT。(UVC，200～275nm)和真空紫外线(UVD，100～在DMEM培养基中(含10％胎牛血清，100kU·L200nm)，研究表明UVB到达地面的量最大，且对人青霉素、100mg·L链霉素)培养。体

6、的危害最大。长期或大量的基础紫外线照射能导1．2．2MTr法检测取对数生长期等量细胞接种致皮肤表皮细胞凋亡相关基因表达的变化，严重者于96孔细胞培养板。接种24h后，用中波紫外线可造成细胞DNA的损伤并导致细胞癌变¨。(UVB)段紫外光疗仪(Waldman，Schwenningen，天然产物中的许多成分具有抑制凋亡的作German)辐射板中细胞，辐射剂量为30mJ／cm(辐用]，可以对抗UVB对机体的损伤。我们前期用人射密度2mW／cm。，辐射时间150S)，之后加入不同表皮角质永生化细胞(HaCaT)制造UVB损伤模型，剂量的SchB及维生素E(vitamin

7、E)(10、1、0．1、0．01并筛选了多种天然产物，发现五味子乙素(SchB)、p~mol·L一)，阴性对照组加入等量溶媒，放置37~C，槲皮素(quercetin)、芸香苷(violaguercitrin)具有较5％CO培养箱24h后，每孔加入501g·LMTr收稿日期：2014一O1一O3，修回日期：2014—02—25溶液，37cc孵育，4h后弃去上清，每孔加入DMSO150基金项目：国家自然科学基金资助项目(No81072964)l，测定光密度值(OD)，并计算Ic。值。作者简介：曹波(1981一)，男，博士，讲师，研究方向：中药药理学，1．2．3Ho

8、echst染色通过Hoe