CORM-2通过激活Caspase依赖性线粒体途径诱导神经细胞凋亡及醒脑静对其干预作用的机制研究-论文.pdf

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1、2013第十五卷第八期~rVo1．15No．8CORM-2通过激活Caspase依赖性线粒体途径诱导神经细胞凋亡及醒脑静对其干预作用的机制研究六刘轶林，洪缨，王晶(北京中医药大学中药学院北京100102)摘要：目的：探讨外源性一氧化碳释放剂(CORM一2)诱导大鼠神经细胞凋亡及醒脑静注射液对其干预作用的机制。方法：在光学显微镜下观察CORM一2对神经细胞形态的影响；通过M1Tr法检测CORM一2对细胞存活率的影响；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率；以WesternBlotting检测相关蛋白的表达。同时观察醒脑静注射液对神经细胞形态，细胞存活率及相关蛋

2、白表达的影响。结果：CORM一2影响神经细胞存活率呈时间依赖性和剂量依赖性；100、200、400、800Ixmol·L～CORM一2作用于神经细胞24h后，可使细胞存活率逐渐降低；可以诱导神经细胞凋亡及Caspase依赖性线粒体途经相关蛋白Caspase一3、Caspase一9及CytochromeC(CytC)的活化，且呈剂量依赖性。选择200Ixmol·L～CORM一2对皮层神经细胞进行诱导损伤，经醒脑静注射液孵育神经细胞20h后，10mL·L及20mL·L醒脑静注射液可明显降低细胞早期凋亡率，细胞Caspase一3、Caspase一9与Cy

3、tC的表达逐渐降低。结论：CORM一2可能通过激活Caspase依赖性线粒体途径诱导神经细胞凋亡，醒脑静注射液可抑制细胞凋亡的线粒体途径从而干预CORM一2诱导的神经细胞凋亡。关键词：CORM一2神经细胞凋亡Caspase线粒体途径醒脑静注射液doi：10．11842／wst．2013．08．010中图分类号：R964文献标识码：A一氧化碳(CarbonMonoxide，CO)致脑损伤发病为今后临床治疗提供基础理论依据。率和死亡率高，是全世界范围极其严重的问题，在细胞凋亡主要有3条途径，第一条是细胞表面很大程度上影响了患者的生活质量。迄今为止，对死

4、亡受体介导的通过胞外信号激活细胞内的CO致脑损伤的发病机制已提出多种学说，如：缺血Caspase一8；第二条是通过线粒体释放凋亡酶激活缺氧学说【l'、自由基损伤学说I31、细胞凋亡学说『3_、因子激活Caspase一9；第三条是内质网途径，内质免疫损伤学说等。这些学说从不同的侧面对CO网应激可特异性激活Caspase一12。活化的致脑损伤做出了相对合理的解释，但到目前为止，Caspase一8、Caspase一9以及Caspase一12均可激活其确切机制仍无定论。近年来，越来越多的研究表Caspase一3等下游效应蛋白酶，将细胞内的重要蛋明神经细胞凋

5、亡在CO致脑损伤的病理过程中扮演白降解，最终导致细胞凋亡。此外，有些蛋白质可着重要的角色，因此，神经细胞凋亡的机制研究将以不通过Caspase，从线粒体内膜腔释放而直接诱导凋亡产生。收稿日期：2013—10—25醒脑静注射液是安宫牛黄丸的精制注射液，其修回日期：2013一l1—19★北京中医药大学自主选题项目(2009JYBZZ—JS041)：醒脑静注射液对一氧化碳暴露诱导的神经细胞凋亡的干预作用及机制分析负责人：王晶。★★通讯作者：王晶，副教授，主要研究方向：中药神经药理和消化药理研究。1725[WorldScienceandTechnology

6、~odernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica]世界科学技术一中医药现代化★专题讨论：临床常物干预研究主要成分有麝香、冰片、栀子以及郁金，具有良好的止消化，吸管轻轻吹打使细胞分散均匀，经200目醒脑开窍、清热凉血、解毒止痛疗效，对多种中枢神金属网过滤。4％台盼蓝镜检，血球计数板进行细胞经系统危重急症均有显著疗效。研究发现，醒脑静计数，调整细胞密度为3×1O个／mL和lX10个／mL注射液能够明显抑制创伤性脑损伤、缺氧、缺血再接种于预先用0．01％左旋多聚赖氨酸溶液包被的灌注等多种损

7、伤因素诱导的神经细胞凋亡。96孑L细胞培养板及细胞培养瓶中，置37℃、5％CO本研究采用外源性一氧化碳释放剂培养箱中孵育。24h细胞贴壁后，全量置换培养液，[Tricarbonyldichlororuthenium(II)dimer，CORM一2】对第3天加入浓度为2．5g·mL阿糖胞苷培养24h体外培养的神经细胞进行诱导损伤，建立CO致脑后，全量置换培养液，以后3天半量置换一次，7天损伤模型，观察Caspase依赖性途径在CORM一2诱后用于实验。导神经细胞凋亡的过程中是否发挥作用，探讨神经1．4细胞存活率实验细胞凋亡的可能作用机制。同时，本研究

8、拟观察醒取接种于96孑L细胞培养板的神经细胞分为6脑静注射液对一氧化碳释放剂诱导神经细胞凋亡组，即空白组、正常对照组、CO