动物源性食品中氯霉素类药物的lc-msms定量分析方法

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1、动物源性食品中氯霉素类药物的LC-MS/MS定量分析方法一、背景氯霉素（Chloramphenicol）是一种广谱抗生素，其对伤寒杆菌、流感杆菌、副流感杆菌和百日咳杆菌的作用良好，对立克次体感染如斑疹伤寒也有效，但对革兰阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。氯霉素对人类的毒性较大，它会引起再生障碍性贫血、新生儿灰色综合症等疾病，尤其是氯霉素的低浓度药物残留会诱发致病菌的耐药性。食品中氯霉素的残留不但对人体造成危害，而且该药已在国外较多国家禁用，严重影响我国食品的出口，因此准确测定食品中氯霉素的残留量具有重要意义。目前《GB/T22338-2008动物源性食品中氯霉素类

2、药物残留量测定》中详细介绍了水产品、畜牧产品和畜牧副产品中氯霉素类化合物残留量的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法，方法中采用内标法定量检测氯®霉素，以及外标法对甲砜霉素和氟甲砜霉素进行定量。本文中将详细介绍采用ABSCIEX3200QTRAPLC-MS/MS检测氯霉素，并且经实验证实ABSCIEXAPI4000系列、API5000以及API5500系列同样适用于该方法。二、化合物信息表1.化合物基本信息化合物英文通用名分子量CAS分子式氯霉素Chloramphenicol323.156-75-7C11H12Cl2N2O5甲砜霉素Thiamphenicol355.0

3、15318-45-3C12H15Cl2NO5S氟甲砜霉素Florfenicol357.073231-34-2C12H14Cl2FNO4S三、前处理方法（GB/T22338-2008）1.样品提取1.1.动物组织（肝、肾除外）与水产品称取试样5g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入100µL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5）工作溶液和30mL乙腈，匀浆，离心5min。将上清液转移至250mL分液漏斗中，加入15mL乙腈饱和的正己烷，振荡5min，静置分层，转移已经层至100mL棕色心形瓶中。残渣中再加入30mL乙腈，振摇3min，离心5min，取上清液转移至

4、同一分液漏斗，振荡5min，静置分层，转移乙腈层至同一棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5mL正丙醇，于40℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5mL丙酮-正己烷（1+9）溶解残渣。1.2.动物肝、肾组织称取试样5g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入30mL乙酸钠溶液，均质2min，加入300µLβ-葡萄糖醛酸苷酶，于37℃温育过夜。消解样品中加入100µL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5）工作溶液和20mL乙酸乙酯-乙醚（75+25），振荡2min，离心5min。取上层有机层入心形瓶中，在40℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5mL丙酮-正己烷（1+9）溶

5、解残渣。1.3.蜂蜜称取蜂蜜试样5g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入100µL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5）工作溶液，5mL水混匀。再加入20mL乙酸乙酯，振摇2min，离心5min，移取有机层到100mL棕色心形瓶中。于离心管中在加入20mL乙酸乙酯，振摇2min，离心5min，合并有机层至同一棕色心形瓶中，于40℃水浴中旋转蒸发至干，加3mL水溶解残渣，混匀。56动物源性食品中氯霉素类药物的LC-MS/MS定量分析方法2.净化2.1.动物组织与水产品用5mL丙酮-正己烷淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将残渣溶解溶液转移到固相萃取小柱上，弃去

6、流出液，用5mL丙酮-正己烷（6+4）洗脱，收集洗脱液于心形瓶中，40℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加1mL水定容，定容液过0.45µm滤膜至进样瓶，待测定。2.2.蜂蜜分别用5mL甲醇，5mL水活化EN固相萃取住，将提取液转移上柱，用5mL水淋洗，用玻璃棒压干1min，用3mL乙酸乙酯洗脱，洗脱液用氮气吹干，用1mL水定容，定容液过0.45µm滤膜至进样瓶，待测定。四、实验方法1.液相条件色谱柱：PhenomenexAqua2.0X50mm，5µm；柱温：45℃；流速：400µL/min；流动相：A，水；B，乙腈；梯度洗脱，洗脱条件见表2：表2.液相色谱条件

7、时间（min）A（%）B（%）075150.5751545050550505.27515875152.质谱条件离子源：TurboV离子源；扫描模式：负离子采集模式：多反应监测MRM表3.氯霉素类化合物MRM离子对化合物名称母离子子离子1子离子2氯霉素321152257甲砜霉素354185290氟甲砜霉素356336185氯霉素-D5（内标）326157——57五、定量质谱数据1.色谱图示例2.定性线性曲线2.1.氯霉素（0.005~1ng/mL）y=1.03850e6x+895.10620（r=0.99809）（weighting:1/x^2）已知浓度实测浓度准确

8、度Leve