银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究.pdf

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1、34黑龙江医药科学2006年10月第29卷第5期银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究钟尉方123王岳鸿于莲1.佳木斯大学2004届研究生黑龙江佳木斯154007;2.佳木斯大学化学与药学院2005届研究生黑龙江佳木斯154007;3佳木斯大学化学与药学院黑龙江佳木斯154007)摘要:目的:考察复方银杏注射液中银杏黄酮苷含量测定的水解条件O方法:采用正交设计法考察水解时间A)~水解温度B)~盐酸浓度C)3个因素对高效液相色谱法含量测定的影响O结果:优化后的水解条件为:水解1.5h80C恒温水浴-1盐酸O结论:该水解条

2、件稳定为准确测定复方银杏注射液中银杏黄酮醇苷提供保证O10molL关键词:复方银杏注射液;正交实验;高效液相色谱法;水解条件中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1008-01042006)05-0034-02复方银杏注射液是根据中医临床经验而开发的复方注温水浴锅天津市泰斯特仪器有限公司O射剂具有增加血管流量改善血液循环抑制血小板聚集1.2药品及试剂防止血栓形成等作用O银杏黄酮是其有效成分目前国内外复方银杏注射液佳木斯大学化学与药学院提供批号对银杏黄酮定量的方法多为反相高效液相色谱法[12]即先060414)

3、;槲皮素~山柰素~异鼠李素购于中国药品生物制品对供试品进行水解使其黄酮苷键断裂测定其主要苷元槲检定所);盐酸分析纯天津市化学试剂一厂);磷酸分析皮素Guercetin)~山奈素Kaempferol)~异鼠李素纯天津市化学试剂一厂);甲醇色谱纯天津市科密欧化学[3]Lsorhamnetin)的含量加和后再乘以2.51的系数折算试剂开发中心);娃哈哈饮用纯净水杭州娃哈哈集团有限公定为银杏总黄酮醇苷的含量O该复方银杏注射剂的含量测定司)O也拟定采用反相高效液相色谱法但在进行含量测定时发2方法及结果现参照药典水解方法处理1

4、的同批次的供试品含量差异大2.1色谱条件与系统适用性所以有必要对供试品的水解条件进行优化和严格控制为其色谱柱ZorbaxSB-C柱5pm4.6mm>150mm)流动质量标准的制定提供依据O18相为甲醇-0.4%磷酸溶液45:55)检测波长为360nm流速1仪器及材料-11.0mlmin柱温30C进样量10plO理论板数按槲皮素峰1.1仪器计算不低于2500异鼠李素分离度大于1.5各峰的确认和分Agilent1100高效液相色谱系统四元泵~自动进样器~离见图1O柱温箱~可变波长扫描紫外检测器)OKD-98-I型电热恒

5、图1对照品及供试品色谱图1)槲皮素峰对照品2)山柰素对照品溶液3)异鼠李素对照品溶液4)复方银杏注射液供试品溶液2.2标准曲线的绘制2.4精密度实验精密称取五氧化二磷干燥过夜的槲皮素3mg~山柰素取槲皮素~山奈素~异鼠李素浓度分别为10.35pg3mg~异鼠李素1mg甲醇溶解定容后稀释成为6个梯度浓-1-1-1的对照品混合液在上述ml~9.54pgml~3.63pgml度0.45pm微孔滤膜过滤作为对照品溶液于上述色谱条色谱条件下连续进样6次O槲皮素~山柰素~异鼠李素的峰面件下进样10pl记录峰面积积分值分别以对照

6、品的浓度为积的RSD分别为0.98%~0.90%~1.00%O横坐标峰面积积分值为纵坐标结果见表1O2.5加样回收率实验表1标准曲线取已测定含量的复方银杏注射剂水解样品6份分别加苷元标准曲线r线性范围pgml-1)入对照品溶液适量相同色谱条件测定计算银杏总黄酮醇槲皮素Y=57.3750X-14.75701=0.99972.07~69.00苷平均回收率为101.23%RSD为1.43%O山柰素Y=50.1940X+15.31101=0.99961.91~63.60异鼠李素Y=54.8570X-1.23091=0.99

7、940.73~24.202.6正交实验及方差分析2.3专属性实验2.6.1因素水平的确定取不含银杏叶提取物的阴性对照注射液按供试品溶液根据文献[45]对银杏黄酮的水解时间从30min到3h水的制备方法制备阴性对照溶液相同色谱条件进样测定检解温度从75C到95C进行预试结果显示温度过低回流过测结果证实:阴性对照溶液在相应保留时间无干扰O于温和而长时间高温水解会造成该复方中的其他组分少量HEILONGJIANGMEDICINEANDPHARMACYOct.2006VOl.29NO.535沉淀而酸度过高或过低会导致含量偏

8、低O因而从条件较合2.6.2实验安排及结果理的几个水平入手采用正交表L49(3D以高效液相色谱仪精密吸取同批次混匀的复方银杏注射液5ml于圆底烧测定的银杏含量为指标对水解时间~水解温度~和酸度进行瓶中按表3加入不同浓度的盐酸溶液5ml甲醇20ml不同优选力求省时节能的水解条件O温度下恒温回流不同时间冷却转移至50ml量瓶中并加表2水解因素水平甲醇至刻度摇匀0