狂犬病毒ELISA抗体检测试验.doc

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1、狂犬病毒ELISA抗体检测试验一、试验材料：1．预包被狂犬病毒抗原的微孔板2．酶标记物3．狂犬病毒IgG阳性对照4．狂犬病毒IgG临界对照5．狂犬病毒IgG阴性对照6．显色液A7．显色液B8．终止液9．浓缩洗涤液（10倍）10．样品稀释液11．封板膜二、操作方法：1．试剂盒放置室温平衡20～30分钟。取出浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水作10倍稀释备用。2．稀释样品：将已分离好的血清用样品稀释液做1:100稀释（即取10μl血清或血浆加入到1ml样品稀释液中），并充分混匀。3．加样：取所需量的预包被微孔板条固定于板架上，加入稀

2、释好的样品，100μl/孔，然后将阳性、阴性对照各加1孔，临界对照加3孔，100μl/孔，另留一孔不加样品作空白对照孔，在记录纸上记录各样品和对照品的次序或位置。剩余的板条放入密封袋中保存。4．孵育：加样完成后，置37℃恒温箱或水浴箱（用封板膜覆盖板条，以避免水珠滴入微孔）中孵育30分钟。5．洗板：甩净孔中液体，拍干，用稀释好的洗涤液加满每孔，停留1分钟后甩净、拍干，反复洗板3次。6．加酶：除空白对照外，其余各孔垂直滴加酶标记物50μl（1滴），置37℃孵育30分钟。7．显色：按第5步洗板3次，拍干后每孔（含空白孔）垂直滴

3、加显色液A、B各50μl（1滴），置37℃避光显色15分钟。8．终止：每孔（含空白孔）立即加入终止液50μl（1滴），混匀后用酶标仪450nm波长测定A值。三、结果判定：1．单波长检测：以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值。2．双波长检测：用酶标仪读取450nm和630nm处的A值，以A450nm—A630nm计算A值。3．阴性对照A值≤0.15,0.20≤临界对照A值平均值≤0.80，临界对照A值平均值/阴性对照A值平均值≥2.0，阳性对照A值＞临界对照A值平均值，证明实验成立，否则试验结果无效，需重新试验。4．

4、如样品孔A值≥临界对照A值的平均值判为阳性；反之为阴性。