絮凝剂产生菌克雷伯氏杆菌的筛选、鉴定及培养条件优化-论文.pdf

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1、第14卷第18期2014年6月科学技术与工程Vo1．14No．18Jun．20141671—1815(2014118—0177—06ScienceTechnologyandEngineering⑥2014Sci．Tech．Engrg．絮凝剂产生菌克雷伯氏杆菌的筛选、鉴定及培养条件优化韩宴秀莫创荣周云新邓国龙周柳香(广西大学环境学院，南宁530004)摘要采用常规细菌分离方法从木薯淀粉黄浆废水中筛选得到一株微生物絮凝剂产生菌，编号为M2。经过形态学特征、生理生化反应试验和16SrDNA基因序列分析鉴定该菌株为克雷伯氏杆菌，命名为Klebs

2、ieUasp．M2。通过单因素实验对菌株M2培养条件进行优化，结果表明最佳培养基种类、培养基初始pH值、培养温度及摇床转速分别为查氏培养基、5、30℃及150r／min。与大部分微生物絮凝剂产生菌上清液表现出絮凝性不同，菌株M2的菌体本身表现出絮凝活性；经过使用超声波破碎仪证明菌体本身具有絮凝活性，最佳絮凝率达到93．20％，具有易于运输、便于使用的优点。菌株M2在以蔗糖作为碳源、KNO作为氮源的情况下絮凝活性最好。关键词木薯淀粉废水微生物絮凝剂产生茵培养条件16SrDNA中图法分类号Q939．99；文献标志码A微生物絮凝剂(micro

3、bialflocculatants，MBF)是1材料和方法利用生物技术获得的一种安全、易降解的新型水处理絮凝剂¨J。从来源来看，微生物絮凝剂主要有41．1材料种类型：直接利用微生物细胞、微生物细胞壁提取菌种来源：采自南宁市某淀粉厂2号黄浆池中物、微生物细胞代谢产物以及通过克隆技术所获得经过特殊处理的二次木薯淀粉黄浆废水。的絮凝剂J。由于微生物絮凝剂可以克服无机高分离培养基：使用通用发酵培养基，pH为自然，分子絮凝剂处理效率不佳、耗费大等缺点和人工合121℃、高压灭菌20minJ。成有机高分子絮凝剂如聚丙烯酰胺具有神经毒性和初筛培养基：为

4、上述不加琼脂的分离培养基。“三致”效应的固有缺陷，无二次污染、可生物降解种子培养液：在试管中加入10mL液体通用发和安全可靠，最终能实现污染零排放，因此越来越受酵培养基，塞好棉塞，121oC，高压灭菌20min。冷到关注，。却至室温后在超净台中操作，加入0．1mL目的菌株目前就国内形势来看，制约微生物絮凝剂发展的菌液，混匀，放人恒温培养箱中培养3d。3d后的关键问题在于生产成本过高和产量低，所以筛选循环以上操作，将此培养液作为产絮凝剂接种时的高效絮凝剂产生菌，并且提高其絮凝剂产量变得极种子液。其重要；同时这也是开发和系统研究微生物絮凝剂

5、1．2方法关键的第一步J。实验从二次木薯黄浆淀粉废水1．2．1絮凝率的测定中筛选出高效生物絮凝剂产生菌M2，此菌株对木薯向50mL具塞比色管中加入0．2g高岭土，再黄浆淀粉废水具有较强的适应能力，能直接利用废加入45mL蒸馏水，上下翻转5次后加入1mL1％水作为营养来源，解决了培养基成本高的问题。本CaC1：溶液和1mL目的菌株的含菌培养液，加蒸馏实验经过形态学特征、生理生化反应试验和16SrD-水至比色管50mL刻度线，匀速上下翻转15次，每NA基因序列分析对菌株进行鉴定，并对该菌株的次翻转以气泡上升完毕为准，静置10min。其他条最

6、佳培养条件进行了研究。件相同，以蒸馏水代替含菌培养液作为空白。于液面下固定位置吸取10mL上清液，在721型分光光2014年2月14日收到南宁市科学研究与度计550nix1的波长下测定上层清液吸光度，通过吸技术开发计划项目(20125257)资助光度的减少定量表示絮凝率。用絮凝率(％)表示通信作者简介：莫创荣，男，副教授，博士。E—mail：mochuangrong@絮凝活性，其计算公式如下6]：163．corn。178科学技术与工程14卷的大小来确定最佳培养基和碳氮源。％=_×l。。％。1．3．2培养基初始pH值和摇床转速对M2絮凝活

7、式中：A为空白水样上清液在550nm的吸光值性的影响OD。nm；为待测水样上清液在550rtm的吸光值用最佳碳氮源培养基作为测试培养基，培养基OD。nm；／z为投加絮凝剂前后水样中悬浮物的去pH值分别调节至3．0～9．0；摇床转速分别调节至除率。80r／min、150r／min、200r／min和240r／min。1．2．2微生物絮凝剂产生菌的初筛实验1．3．3培养温度对M2絮凝活性的影响实验筛选纯种菌种的流程为：采样预处理一富将恒温振荡器的水浴温度分别调节至25℃、集培养一浇注平板法及平板划线法分离微生物一挑30cc、35℃和40℃定

8、时取样，其他条件采用以上选菌落、获取单菌落，平板划线法传代培养纯化一纯实验得出的最佳培养条件。种菌种的保存J。按照以上流程筛选出纯种菌种2结果与分析后，用肉眼观察的方法，观察静置后的高岭土悬浮液是否能形成絮