实验一、环境中微生物类群的观察.doc

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1、实验一环境中微生物类群的观察1.目的和原理微生物是自然界屮用肉眼不能盲接看到的一大类体形微小、形态各异的生物的总称，我们可以借助显微镜来观察它的形态并区分其类群。由于菌体透明，还可通过染色来区分它的细微结构或作细菌学鉴定（格兰氏染色）。2材料与器皿显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、锻了、培养111L。蒸镭水、二甲苯、香柏油、擦镜纸。结晶紫稀染液、结晶紫浓染液、藏花红染液、碘液，乙醉（95%）、乳酸石炭酸液。2.4.菌种：枯草杆菌、大肠杆菌、八叠球菌、酵母菌悬浮液、径阳链霉菌（5406）、产黄青霉、黄曲霉、根霉。2.5.培养基：高氏一号合成培养基、察氏培养

2、基、酵母菌培养基、马铃薯匍萄糖培养基。u丿jg—y少3.活体染色（1）在载玻片上加一滴结晶紫稀染液。（2）用接种针以无菌操作取少许枯草杆菌或八叠球菌菌体于结晶紫稀染液中，轻轻磨擦使细菌在染液中均匀分布。（3）把盖玻片的一边先接触染液的一端，然后将盖玻片轻轻放下，使它盖在染液上，屮间不能有气泡。（4）用低倍镜和高倍镜观察细菌的形态及其运动情况。4.简单染色（1）涂片：在洁净的载玻片屮央滴一小滴蒸镭水，用接种针以无菌操作从菌种斜面上取少量大肠杆菌或枯草杆菌菌体与水混合，涂成均匀的薄层。（2）固定：将涂片放在离火焰较远处，以微热烘干，温度以不烫手为宜，烘干后

3、再在火焰屮快速通过3—4次，使茵体完全固定在载玻片上。（3）染色：用结晶紫浓染液染一分钟。（4）冲洗：倾去染液，斜置载玻片，用水冲去多余染液，流出的水无色为上。要注意不能将水直接冲在涂菌的位置（5）干燥：用微热烘干或自然凉T。（6）镜检：先用低倍镜找到部位，再川高倍镜、油镜观察。1.格兰氏染色（1）涂片、固定：同上，菌种用大肠杆菌和枯草杆菌。（2）染色：将经固定后的涂片用结晶紫染液染1分钟，水洗，使干。（3）媒染：用碘液媒染1分钟，水洗，使干。（4）脱色：连续滴加95%乙醇使其脱色，肓至滴下的乙醇无色为止（约0.5到1分钟），水洗，使干（5）复染：用藏

4、花红复染1分钟，水洗，使干。（6）镜检：用高倍镜及油镜观察染色情况，格兰氏阳性（G+呈紫色；格兰氏阴性（G-）呈红色。2.4用压滴法观察酵母菌（1）在载玻片屮加一滴酵母菌悬浮液。（2）取一块盖玻片，将其一端接触水滴，慢慢放下，盖在酵母菌悬液上，勿使产生气泡（3）用低倍镜及高倍镜观察酵母菌的形态及出芽方2.5.根霉的形态观察（1）用接种环沾取斜面菌种上的根霉抱了，用点种法在马铃薯葡萄糖培养基平板上整齐地接上10点左右，然后将皿倒置，再在皿盖上放一张无菌载玻片。（2）28°C培养2〜7天。（3）用辍子取出载玻片，置显微镜下观察，注意观察假根、砲囊梗、砲子囊

5、、匍匐枝。1.5.青霉、曲霉的形态观察（1）用接种环沾取斜面菌种上的产黄青霉与黄曲霉抱了，用平板划线法接种在马铃薯葡萄糖培养基平板上，倒置于28°C培养3〜5天。2.在载玻片上滴一滴乳酸石災酸溶液，用尖头银了夹取呈肯色与白色交界处有菌落的培养基少许，横放在溶液屮，盖上盖玻片(勿使出现气泡)，在盖玻片上轻压几下，然后在低倍镜下观察。2.5.用插片法观察放线菌3.用平板划线法，将径阳链霉菌接种在高氏1号合成培养基平板上，然肩在划线处成45度角度用银子斜向插上无菌盖玻片数片。4.倒置培养111L于28°C温箱内培养：3?/FONT>5天。5.用锻了取出盖玻片

6、，将其平放在载玻片上，以低倍镜及高倍镜观察放线菌的气生菌丝、也了丝和砲了的形态。5.5.染液的配制3.8.1结品紫稀染液结品紫0.5克蒸馆水1000毫升6.&2结晶紫浓染液甲、结晶紫3克乙肿(95%)20毫升乙、草酸钱0.8克蒸彳留水80毫升将甲、乙两液混合后稀释10倍使用。3.8.3藏花红染液藏花红0.25克乙醇(95%)10毫升蒸憎水100毫升3.8.4碘液碘1.0克碘化钾2.0克蒸憾水300毫升配制时，先将碘化钾溶于5〜10毫升蒸Y留水屮，再加入1克碘,使其溶解后,加蒸馆水至300毫升。4实验结果1.1.绘出大肠杆菌、枯草杆菌、八蒂球菌、酵母菌、

7、放线菌、产黄青霉、黄

8、11

9、霉和根霉的个体形态图。2.2.记录大肠杆菌和枯草杆菌格兰氏染色的结果。