结核杆菌热休克蛋白70在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定.pdf

《结核杆菌热休克蛋白70在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#$%%#年&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12,-.$%%#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!结核杆菌热休克蛋白!"在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定彭明利"凌宁许红梅卿玉玲任红（重庆医科大学病毒性肝炎研究所，重庆0%%%!%）摘要为获得结核杆菌热休克蛋白5%在毕赤酵母中的分泌表达。构建了酵母表达质粒=ABC"D/"&35%，并将其线性化后用电穿孔法导入4#

2、0"#+3+&/(*#&EF!!&，经ACG方法筛选出阳性菌落，在%*&H甲醇诱导下分泌表达。所得产物经离心收集上清、超滤浓缩脱盐、亲和层析后，分别用FIF/AJE8、K3LM3N;O)(M和动物免疫实验对上清中的重组PL=5%进行鉴定，并考察产物对IC的作用。经FIF/AJE8、K3LM3N;O)(M分析表明表达的PL=5%表观分子量为5%QI并能特异性地与抗/,M*PL=5%单抗结合，动物实验表明重组的PL=5%能在体诱导免疫应答。重组PL=5%能够诱导IC成熟并释放2?!型细胞因子。摇瓶发酵表达量达!$

3、%9

4、决定，热其融合蛋白的获得都是采用大肠杆菌胞内表达的方休克蛋白自身起着多肽伴侣功能。肿瘤组织PL=/式，这种方法存在表达量低、纯化复杂等缺点。本研肽复合物因纯化复杂和来源受限大大限制了它的应究尝试将结核杆菌"&35%克隆到酵母表达载体用，现已证实在体外重组的PL=/肽复合物在没有任=ABC"D中，应用毕赤酵母（4#0"#+3+&/(*#&）表达系统，何佐剂的情况下也能诱导针对所携带抗原肽特异性以胞外分泌的方式表达了PL=5%，并对表达的蛋白细胞毒2淋巴细胞（C.(M(7:@2S.9=?(@.M3，C2S）效质进

5、行了生化和免疫学鉴定，为进一步研究制备结应。其中应用最为广泛的PL=是结核杆菌PL=5%和核杆菌PL=5%/抗原肽疫苗以及结核杆菌PL=5%与抗［!］哺乳动物<="4。,(N(:等设计了一系列对PL=5%原肽的融合蛋白疫苗提供物质基础。有高度亲和力的杂交肽在体外与其重组，免疫小鼠［$］#材料和方法后获得特异性的免疫应答。8*G(9-;等应用J型流感病毒核心蛋白=+A（$%4U$$"）与结核杆菌#$#材料PL=5%在适当的缓冲溶液中重组为复合物，也能引4#0"#+3+&/(*#&EF!!&表达宿主菌及整合表达质

6、［#］起抗原特异性的C2S作用。FN:V-LM-V-等应用体外粒=ABC"和=ABC"D为B;V:MN(<3;公司产品。含结核重组<="4/’F’（泡状口炎病毒）和PL=5%/’F’在动物杆菌热休克蛋白基因（"&35%）的质粒=E82/"&35%由免疫实验证实了这一观点。本实验室构建。W+X（YR(-9:;(-@:Z）和蛋白胨为此外，PL=5%还能诱导JACL成熟，尤其是IC细I:[@(公司产品，限制酶、20I+J连接酶购自G(@?3［0］胞。,-N:-等证实重组人PL=5%能够诱导IC细胞公司，=[I+J

7、聚合酶为AN(93<-公司产品，鼠J;M:/的成熟并提高CI0%、CI1#、CI14、PSJ/IG分子在PL=5%抗体（,XS公司产品）和细胞因子BS/4、BS/!$、IC细胞上的表达。同时PL=5%和<="4能诱导JACL2+6/!（8;Z(<3;公司）购自深圳晶美，PGA标记羊抗细胞分泌细胞因子如BS/4、BS/!$、2+6/!，其中BS/!$鼠B

8、$&；6-7：14/$#/4#1$$4"4；8/9-:)：9:;<):=&&>.-?((*@(9*@;9期彭明利等：结核杆菌热休克蛋白01在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定:F0限公司，!"#$%&%’()*购自+,&-%公司，其它试剂均为液，用!"#$%&%’()*分离纯化，参考文献用含:3--(