DB34∕T 3190-2018 动物尿液中克伦特罗等8种β-兴奋剂的残留测定 胶体金免疫层析法.pdf

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1、ICS65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T3190—2018动物尿液中克伦特罗等8种β-兴奋剂的残留测定胶体金免疫层析法Detectionof8β-agonistssuchasClenbuterrolresiduesinanimalurineColloidalgoldimmunochromatographicmethod文稿版次选择2018-08-08发布2018-09-08实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T3190—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由安徽省兽药饲料监察

2、所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、宁国市金东坊农业开展有限公司、宁国市金鼎家庭农场、浙江迪恩生物科技股份有限公司、铜陵市义安区动物卫生监督所、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省水产技术推广总站、阜阳市动物卫生监督所。本标准主要起草人：吴昊、许世富、李东风、孙德祥、潘孝成、张利亚、方芳、徐月清、郭恒心、龙中原、胡群芳、郑举、吴兵、何为俊、郑新勇、钱昌银、程扬、吴海芬、宋亚伟、王群、汪百才、石翠芳。IDB34/T3190—2018动物尿液中克伦特罗等8种β-兴奋剂的残留测定胶

3、体金免疫层析法1范围本标准规定了动物尿液中的克伦特罗、沙丁胺醇、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、妥布特罗、特布他林、盐酸氯丙那林8种β-兴奋剂的胶体金免疫层析法。本标准适用于动物尿液中克伦特罗等8种β-兴奋剂的检测。本标准检测限：克伦特罗、沙丁胺醇、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、妥布特罗、特布他林均为3μg/L；盐酸氯丙那林为8μg/L。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析

4、实验室用水规格和试验方法3原理本试验采用胶体金竞争抑制法。将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端，使液体慢慢向吸水纸另一端渗移。在样本移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的β-兴奋剂在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上的β-兴奋剂人工抗原的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显紫红色，结果为阴性。4试剂和材料除非另有说明，本法所

5、用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。注：不同检测卡制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按说明书要求规范操作。4.1β-兴奋剂胶体金检测卡（八合一）组成4.1.1β-兴奋剂类（八合一）多克隆抗体。4.1.2胶体金。胶体金溶液采用氯金酸还原法制备，应为带负电的紫红色疏水胶体金溶液，金颗粒大小应在30nm～60nm之间。4.1.3硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜表面应平整、光滑、白净，没有划痕、凹印、小孔、水迹、橘皮状或其他肉眼能见的瑕疵，无灰尘、油渍或其他杂物。硝酸纤维素膜宽度为（25.4±0.5）mm，长度在

6、（100±2）mm，厚度在（185±19）μm，毛细流速度为（180±45）s/40mm。1DB34/T3190—20184.1.4聚酯纤维膜。聚酯纤维膜表面形状应为基本均匀的矩形，无明显歪斜现象。色泽好，白色，表面洁净，均匀度好，无破损，无起皱，无污点，无色斑，无霉点，无异味，无杂质及灰尘。聚酯纤维膜2重量在（98.3±10.0）g/m，厚度在（0.42±0.07）mm，长度为（305.0±2.5）mm，宽度为（254.0±2.5）mm。4.1.5吸水纸。4.1.6底板。4.1.7塑料盒。4.1.8塑料吸管。4.2电子天平：

7、感量0.1mg。4.3离心机：≥5000rpm。4.4阴性对照：取不含上述8种β-兴奋剂尿液为阴性对照。4.5阳性对照4.5.1克伦特罗阳性尿样：取克伦特罗标准溶液用空白尿液稀释为3μg/L。4.5.2沙丁胺醇阳性尿样：取沙丁胺醇标准溶液用空白尿液稀释为3μg/L。4.5.3西布特罗阳性尿样：取西布特罗标准溶液用空白尿液稀释为3μg/L。4.5.4马布特罗阳性尿样：取马布特罗标准溶液用空白尿液稀释为3μg/L。4.5.5溴布特罗阳性尿样：取溴布特罗标准溶液用空白尿液稀释为3μg/L。4.5.6妥布特罗阳性尿样：取妥布特罗标准溶

8、液用空白尿液稀释为3μg/L。4.5.7特布他林阳性尿样：取特布他林标准溶液用空白尿液稀释为3μg/L。4.5.8盐酸氯丙那林阳性尿样：取盐酸氯丙那林标准溶液用空白尿液稀释为8μg/L。5检测步骤5.1样品制备取新鲜尿液或回至室温的冷冻/冷藏尿液，直接用于检测。若尿液混浊，于