《细胞骨架的观察》PPT课件.ppt

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1、实验七细胞骨架微丝的光学显微观察实验目的微丝概述实验原理仪器、材料与试剂实验步骤实验报告及思考题下一次实验预告实验目的掌握用考马斯亮蓝R250染色观察植物细胞内微丝的方法。细胞骨架的观察微丝概述细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament，MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediatedfilament，IF）。细胞（特别是真核细胞）中的骨架系统，不仅

2、仅是活细胞的支撑结构，决定细胞的形状，而且与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化、极性生长等生命活动密切相关。观察骨架方法？实验原理本实验观察由微丝平行组成的纤维束，当细胞充分铺展时，经考马斯亮蓝R250染色可看到沿细胞一定方向伸展的纤维束。考马斯亮蓝R250可以染各种蛋白，并非特异染微丝，实验中用1%TritonX-100抽提掉胞质中的蛋白（除骨架蛋白外），能清楚地显示微丝束呈深兰色。（？）Mg2+高浓度Na+K+诱导G-actinF-actin含ATPCa2+低Na+K+细胞骨架的观察仪器、材料与试剂仪器：

3、光学显微镜材料：植物洋葱每二人一套的用具:平皿或试管，镊子、吸管；每人一套的用具:载玻片（为区别细胞的正反面，作个标记)盖玻片、吸水纸等。试剂(1)磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH７.３），(2)0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8），(3)M-缓冲液，(4)1％TritonX-100（用M-缓冲液配）(5)0.2%考马斯亮蓝R250，(6)3.0%戊二醛（用0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制）细胞骨架的观察M－缓冲液配方咪唑（Ph6.7）3.4gKCl3.73gMgCl2·6H2O0.10gEGTA0.38gEDTA·2H2O0.04gβ－巯

4、基乙醇70μl甘油294.8ml水定容1000ml实验步骤1）取PBS液4ml培养皿中,再驳取洋葱鳞茎内表皮约1cm2若干片，放入盛有磷酸盐缓冲液的培养皿中（每二人用一个容器）。2）吸去缓冲液，用1%TritonX-1004ml处理洋葱表皮25-40min。3）除去TritonX-100，用M-缓冲液充分洗3次，每次约10min4）加3.0%戊二醛固定液4ml（用0.2mol/L的磷酸缓冲液pH6.8配制）固定0.5h。5）用PBS洗3次，滤纸吸去残留液体。6）0.2%考马斯亮蓝R250染色30min。7）用蒸馏水洗数遍，降低背景。8）将样品

5、置于载玻片上，加盖玻片，在光学显微镜下观察。9）结果：微丝束呈深蓝色细胞骨架的观察实验报告及思考题1画出所观察到的微丝图像。2说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？3说明M-缓冲液的作用是什么？细胞骨架的观察光镜下显示细胞骨架：红色显示微丝，绿色显示微管2.植物组织培养Ⅲ:外植体的培养诱导与观察下次实验：1.小鼠骨髓染色体的制备观察