抗华支睾吸虫成虫抗原McAb的制备及其功能的研究.pdf

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1、目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·2Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”66刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92方法

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·15结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43论文图片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”57攻读硕士学

3、位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“73论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·74论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯74论文审阅认定书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75徐州医学院硕士学位论文缩略词BSACA缩略词表Abbreviation英文全称BovineserumalbuminAntigenofClonorchissinensisDMSODemethylsulfoxideELISAEnz

4、ymelinkedimmunosorbemassayFPLCFastproteinliquidchromatographyHEPESHydroxyethylpiperazineethanesulfonic脚HTIgGMcAbNCODPAGEPBSPEGHI冲SDS瞄sTBSTMB中文全称牛血清白蛋白华支睾吸虫抗原二甲基亚砜酶联免疫吸附试验快速蛋白液相色谱羟乙基哌嗪乙磺酸Hypoxanthine-aminopterin—thymidine次黄嘌呤．氨基喋吟．胸腺嘧啶Hypoxanthine-thymidineImmunoglobulinGMonoclonalantibodyN

5、itrocelluloseOpticaldensityPolyacrylamidegelelectrophoresisPhosphate-bufferedsalinePolyethyleneglycolHorseradishperoxidaseSodiumdodecylsulphateN-trishydroxymethylaminomethane次黄嘌呤．胸腺嘧啶免疫球蛋白G单克隆抗体硝酸纤维素膜光密度聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液聚乙二醇辣根过氧化物酶十二烷基磺酸钠N一三羟甲基氨基甲烷Tris-buffersaline"Iris缓冲盐溶液Tetramethy1benzid

6、ine四甲基联苯胺后，使免疫小鼠脾细胞具有稳定分泌抗华支睾吸虫抗体的能力。在融合剂PEG的作用下将免疫小鼠脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合，获得杂交瘤细胞。在HAT和HT选择培养基的培养条件下，以间接ELISA法对获得的杂交瘤细胞进行克隆化筛选。对稳定分泌抗华支睾吸虫McAb株采用动物体内诱生的方法进行制备。以饱和硫酸铵沉淀法和FPLC法对获得的单抗腹水进行纯化和纯度鉴定。以间接ELISA法对单抗腹水进行效价测定、亚类测定及特异性检测，Dot-blot法检测单抗免疫学活性。用IFAT进行单抗对虫体的识别部位观察，用免疫组化观察单抗与感染小鼠肝脏组织中抗原的结合。结果经过

7、动物免疫、细胞融合、选择性培养，克隆化筛选后获得l株稳定分泌抗华支睾吸虫成虫抗原的单克隆抗体株，命名为D10，该细胞生长良好，稳定性好，经过连续传代20次，一70℃冰箱保存后复苏仍然具有良好生长状态及稳定分泌抗体的能力；用此株单抗制备小鼠腹水液，纯化后腹水蛋白浓度为2．2mg／m1，抗体效价检测达到1：200000以上，单抗亚类鉴定显示为IgG，类，FPLC法观察见纯化单抗D10的洗脱峰只有一个单一峰，而且对称性好，纯度达到90％以上oSDS-PAGE电泳显示单抗的重链分子量为50KDa，轻链分子量为26KDa。E