环氧合酶2及诱导型一氧化氮合酶在子宫内膜癌组织中的表达及意义.doc

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1、环氧合酶2及诱导型一氧化氮合酶在子宫内膜癌纟I［织中的表达及意义【摘要】目的探讨环氧合酶2(COX2)与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在子宫内膜癌组织中的衣达及与子宫内膜癌发生和进展的关系。方法应用免疫纽化方法检测30例子宫内膜癌组织中COX2和iNOS的表达；并以逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)技术检测COX2及iNOSmRNA的表达。结果子宫内膜癌纽织中COX2及iNOS蛋白阳性表达率分别为66.7%和73.3%；子宫内膜癌及癌旁纽织屮COX2及iNOSmRNA的表达均明显上调。屮分化内膜癌纽织COX2蛋白的表达显著高于低分化的癌纽•

2、织(PvO.05)。子宫肌层浸润深度＞1/2的iNOS表达明显高于肌层未受累或W1/2的患者30例(Pv0.05)。COX2和iNOS蛋白的衣达呈明显的止相关(1=0.601,PV0.001)。结论COX2和iNOS的高农达与子宫内膜癌的发生及发展密切相关;COX2可能主要参与子宫内膜癌发生的早期;iNOS的高表达与子宫内膜癌浸润能力有关。【关键词】子宫内膜癌环氧合酚2一氧化氮合酶免疫纽化环氧合酚2(Cyclooxygenase2,COX2)是炎症过程中一个重要的诱导酶，并参与了肿瘤的发生与转移［1］。一氧化氮(nitricoxide,NO

3、)是人体内重要的信号传递分子，它是山一氧化氮合酶(Induciblenitricoxidesynthase,iNOS)催化底物L精氨酸而生成的。检测一氧化氮合酶的表达，可间接推测NO的生成.iNOS可诱导COX2的表达及催化生成NO而加强COX2的活性［2］。本研究旨对COX2及iNOS这两种诱导酶在人类子宫内膜癌中的表达情况及临床病理意义作一探讨。1材料和方法1.1材料选自本院1997年2月〜2002年11月就诊本院妇科的子宫内膜癌患者30例，其屮腺癌29例、腺鳞癌1例；依据国际妇产科联盟(FIGO,1988年)临床分期标准，I期20例、

4、II期7例、III期2例、IV期1例；按WHO方法病理分级G1级16例、G2级11例、G3级3例；子宫肌层浸润深度＞1/2者11例、≤l/2者或阴性者19例；淋巴结转移阳性者2例；阴性者28例。患者平均年龄为60.3岁(33〜75岁),正常对照组5例,为同期因单纯子宫肌瘤行子宫切除术的患者。所有患者术前均未有服用非銜体类抗炎药的记载。免疫纽化标本均为10%甲醛固定后的石蜡包埋标本；RTPCR技术检测的标本取白癌、癌旁及止常组织，放入液氮、置入・70°C冰箱内保存。1.2试剂COX2和iNOS蛋白多克隆抗体及SPStreptavidin

5、/PeroxidiiseKit山北京中山生物技术公司提供美国SantCruz公司产品。Trizol一步法RNA提収试剂盒为Gibco公司产品；RTPCR试剂盒为Promega公司产品。1.3方法1.3.1SP免疫纽•化染色采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶联结免疫纽化(SP)法检测。染色程序按SP染色试剂盒说明书操作。COX2和iNOS抗体的工作浓度均为1:100。COX2以结肠癌组织作为阳性对照；iNOS以乳腺癌纽•织作为阳性对照；每次均以PBS代替一抗作为阴性对照。1.3.2RTPCR技术检测(1)RNA提取依据RNA裂解液Trizol

6、试剂盒说明提収冻结组织中总RNA,以紫外(SHIMADZUUV2401PC)测总RNA的纯度及含量。(2)引物设计合成COX2基因上游引物Pl：5′GATTATGTGCAACACTTGAG3′,P2：5′CATGTTCCAGCAATATAGAG3′,扩增产物为214bp；iNOS基因上游引物为P3:5′GGACCACCTCTATCAGGAAGAA3′,5′ATAACGTTTCTGGCTCTTGAGC3′,扩增产物为327bp°采用&bcta;ac

7、tin为内参照，其上游引物为5′ATAACGTTTCTGGCTCTTGAGC3′,下游引物为5′GGAAGGAAGGCTGTAAGAGT3′扩増产物为540bp。（3）RTPCR检测分别取总RNA（5μg）MJSuperScriptII逆转录酶进行逆转录。PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶（漠L2锭染色）电泳80V60min,凝胶呈像系统（BioRad2000,美国伯乐公司）观察分析结果。1.4免疫组化结果判定COX2和iNOS染色的阳性为胞浆出现棕黄色颗粒。根据阳性细胞所占比例及相应染色强

8、度，双盲予每张切片评分［3］。0分：无染色；1分：<10%的细胞阳性，细胞染色弱阳性；2分：10%〜50%的细胞阳性或染色强阳性；3分：75%的细胞阳性。二项指标综合评分≤