革兰氏染色法操作规程.doc

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1、文件名称革兰氏染色法操作规程第2页，共2页文件编码BPZK3-SOP.F025版本号00革兰氏染色法操作规程文件编码BPZK3-SOP.F025版本号00代替文件革兰氏染色法工作标准代替文件编码BPSOS02.226-00部门职务签名日期起草人QC室QC人员审核人QC室主管审核人QA室QA人员审核人QA室主管格式审核QA室文件管理员批准人质量部经理颁发部门质量部生效日期分发份数Copy№分发部门质量部QC室成都华神生物技术有限责任公司质量管理体系文件文件名称革兰氏染色法操作规程第2页，共2页文件编

2、码BPZK3-SOP.F025版本号001目的建立革兰氏染色法操作规程，确保革兰氏染色法操作规范化、科学化。2范围适用于用革兰氏染色法对细菌进行分类和鉴定。3职责3.1检验员：负责按本规程进行革兰氏染色操作。3.2QC主管、质量部经理：负责监督。4内容4.1仪器与用具酒精灯、洁净的盖玻片、接种环、滴管、生物显微镜。4.2材料4.2.1试剂结晶紫、番红、碘化钾、碘、95%乙醇、草酸铵、香柏油。4.2.2试液及配制方法4.2.2.1结晶紫染色液：称取结晶紫2g，溶于20ml95%乙醇中；称取草酸铵0.

3、8g，溶于80ml水中；将两种溶液混合，静置48h后使用。4.2.2.2碘染色液：称取碘化钾2g，加5～10ml水使充分溶解，加碘1g，待完全溶解后，加水至300ml。4.2.2.3番红复染液：称取番红0.25g溶于10ml95%乙醇中，然后加水100ml。4.3操作步骤4.3.1样品固片取一干净的载玻片，用接种环挑取一环无菌水于载玻片中，挑取少量菌于生理盐水中涂片或直接滴一滴待检菌在盖玻片中央，自然干燥固定。4.3.2初染滴加结晶紫染液于已固定的涂片上，染1min，用水冲洗、甩干。4.3.3媒染

4、滴加碘染色液，液作用1min，用水冲洗、甩干。4.3.4脱色成都华神生物技术有限责任公司质量管理体系文件文件名称革兰氏染色法操作规程第2页，共2页文件编码BPZK3-SOP.F025版本号00滴加95%乙醇脱色，置白色背景下，侧动盖玻片，直至无紫色脱落为止（约为20-30秒），立即用水冲洗、甩干。4.3.5复染滴加番红复染液，染1-2min，用水冲洗、甩干。4.3.6镜检置油镜下观察。先用低倍镜找准目标，于涂有样品处滴加香柏油一滴，用油镜观察。4.3.7结果判定革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈

5、红色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常呈假阳性。4.4注意事项4.4.1待检菌菌龄应为18～24h。一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较稳定，不易受菌龄长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24h可变为阴性。故培养物越陈旧，菌细胞衰老、死亡，则染色常为阴性，造成错判。4.4.2涂片不宜过浓厚。过于密集的菌体，因洗脱不匀常呈假阳性。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以温热不烫手为宜，以免菌体受损，致染色反应不准。4.4.3革兰氏染色操作的关键步骤是

6、对脱色的掌握，脱色时间不足，革兰氏阴性菌可染成阳性菌；脱色过度，革兰氏阳性菌可染成阴性菌。5相关/支持性文件无。6记录无。成都华神生物技术有限责任公司质量管理体系文件