花色色素分析实习.doc

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1、实习“花色”第八学期园艺学对于花色色谱來说有三类结构完全不同的物质：类黄酮、类胡萝I、索和甜菜碱。其屮类黄酮特别是花青素是最重要的花色索。关于类黄酮生化和遗传学方面的细节在附件一屮集屮列举。萃取和鉴定花青素昔、花青素和其他类黄酮花青索和其他类黄酮可以利）（］1%的甲醇盐酸（l%MeOH/HCl=97mlMethanol+3ml36%HCI）从花瓣或者其他植物部位萃取出来。为了防止花青素降解，萃取最好在喑处和4。C条件下进行。盐酸能够使花青素稳定。根据需要和可支配时间不同可以选择上动和被动萃取方法。（1）主动（快速）萃収：将部分含有花青索的植物组织和少量1%的MeOH/HC

2、l一块在离心管里面弄碎（川小铲子）或者在研钵里而捣碎，组织残渣可以选择离心去掉。优点：■快速萃取■得到浓缩的花青索萃取物，可以立即用來进行分光光度计检测或者色谱检测缺点：■对于定量分析來说不是十分精确，或许不是所有的色素能够被同时萃収出來•对于大量样本的试验来说，消耗大量的操作时间（2）被动（慢速）萃取：将含有花青索的组织放在密封良好的器皿里面（离心管、烧瓶等）用1%的MeOH/HCl淹没，然后放在4度暗处（冰箱里面）儿天其至儿周萃取优点：■大量样本时减少萃取操作时间■可以进行定性分析，例如1克花放在20-40ml1%的MeOH/HCl里而萃取人约40个小时，随后可以用分

3、光光度计来测量其含量缺点：■萃取吋间长■萃取物需要--般情况下需要在旋转蒸发仪里面浓缩后才能用來进行色谱分析。被动萃取同样对于其他类黄酮（例如黄酮醇、黄酮、黄烷酮、二轻黄酮醇）的提収具有优势。尽管他们的萃取液不是1%的MeOH/HCl而是乙酸乙酯（EthylacegEfoAc）.这样的话在其他类黄酮被萃取出的时候，花青素就能保留在水相里而。不管哪种萃取方法，萃取物都可以在4度暗处超过一个月其至一年保存。被萃取的植物组织应该在保存前去掉（离心、过滤）。实习内容：-用1%的MeOH/HCl主动和被动萃取一种植物两个品种（系）不同花色的花・用MeOH（不含盐酸）被动萃取这些殆系

4、・用EtoAc（CH3C00C2H5）被动萃取这些品系II.分光光度计检测类黄酮在600nm和200mn区域附近具有两个吸收峰的特征谱，一个在可见光区域（峰I）,另一个在紫外区域（峰II）。在用1%的MeOH/HCl萃取的Anthocyanin及Anthocyanidin峰I的吸收值为天竺葵索Pelargonidin（Pg）:520nm,Pelargonidin-Glycoside:505-512nm矢车菊素Cyanidin(Cy):535nm,Cyanidin-Glycoside:523-528nmE燕草素Delphinidin(Dp):545nm,Delphinidi

5、n-Glycoside:535-538nm峰II-•般情况下吸收高峰位于275nm。其他类黄酮的吸收光谱人多数是在纯甲醇里面测量，其屮列举下述吸收值：对于黄酮醇Flavonol(例如山蔡酚Kaempferol(Km),榭皮素Quecetin(Qu),杨梅素Myricetin(My))和他们的糖昔(Glycoside)来说，峰I位于350nm和380之间，峰II位于266nm和275nm之间。对于黄酮Flavone(例如芹菜素Apigenin(Ap),木犀草素Lueolin(Lu))以及他们的糖苛來说，峰I位于330nm和350之间,峰II位于270nm附近。二氢黄酮醇Di

6、hydroflavonol(例如Dihydrokaempferol(DHK),Dihydroquercetin(DHQ),Dihydromyricetin(DHM))R在紫外区域290nm处有一个吸收峰。黄烷酮(例如柚皮素Naringenin(Nar),圣草酚Eriodictyol(Eri))也只在288nm含有一个峰。吸收光谱需要在紫外可见分光光度计测量。测量通过在600nm和200nm之间对比类黄酮萃取液和溶液的光吸收差别进行(Extinktion)o测量必须用石英比色杯，因为觀•料比色杯不适于测量用，因为犁料本身在紫外区域也有吸收。作业：(1)测量特定类黄酮的吸收光

7、谱。天竺葵索、飞燕草索、矢车菊索以及他们的糖甘及山蔡酚、刪皮索、芹菜索、木犀草索的原液(1mg/mll%MeOH/HCl)作测量用。20M原液稀•释到1480M1%MeOH/HCl后放置到1.5ml冇英比色杯以稀释液做对照进行测量。(2)测量花瓣的萃取物的吸收光谱，萃取液用1%MeOH/HCl稀秣，直到所有的重要的峰都能够在分光光度计的测量范囤内显现(吸收值最好位于0.5和1.5之间)。评估：■收集最重要的峰■标样与花朵萃取物的最大值・糖基化对吸收峰最大值有什么影响・在萃取的花里而，哪些花青素甘可能是成色的主要组成部分。・有哪