在线固相萃取-高效液相色谱法同时测定人尿液中7种多环芳烃代谢物.pdf

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1、第42卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第12期2014年l2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1723～1728DOI：10．11895／j．imn．0253-3820．140768在线固相萃取-高效液相色谱法同时测定人尿液中7种多环芳烃代谢物游钒朱岚何玲冉良骥。金燕。孙成均“(四川大学华西公共卫生学院，成都610041)(四川省疾病预防控制中心，成都610041)(赛默飞世尔科技(中国)有限公司，上海201023)摘要采用双三元液相色谱系统结合荧光检测器，建立了在线固相萃取一液

2、相色谱法同时测定人尿液中7种多环芳烃代谢物的方法。目标化合物首先在TurboflowCyclone固相萃取柱上在线富集浓缩，然后通过六通阀转移至Hypemi]GreenPAH色谱柱，以乙腈一水为流动相进行梯度洗脱分离，流速1．0mL／min，柱温30℃，荧光检测器检测，分离周期为20min。在优化的色谱条件下，5～2000ng／L或50～20000ng／L范围内，7种多环芳烃代谢物均呈良好的线性关系(r≥0．999)，方法检出限为0．5～15ng／L，加标回收率为80．7％一110．7％。应用本方法对吸烟和非吸烟人群尿液中7种多

3、环芳烃代谢物的含量进行了测定，吸烟者尿液中的2一羟基萘、l一羟基萘、2一羟基菲、2一羟基芴、4．羟基菲、6一羟基麓显著高于非吸烟者。关键词多环芳烃；代谢物；人尿液；在线固相萃取；高效液相色谱法1引言多环芳烃(PAHs)是人类最早发现的一类环境有机致癌化合物_l』。PAHs广泛存在于空气颗粒物和烟熏烧烤类食品中。另外，香烟烟雾中也含有高浓度的PAHs。PAHs种类繁多、在环境中分布广，主要通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体，经体内代谢转化后，生成DNA加合物。所以，PAHs在致癌类化合物中占有相当重要的地位J。自20世纪80年代，许

4、多学者研究人体对PAHs的暴露综合评价的生物标志物。目前研究最多的接触生物标志物是尿中的单羟基多环芳烃(OH—PAHs)。高沸点多环芳烃的代谢产物主要通过粪便排泄(在尿中排泄小于1％)，而且尿中的浓度非常低。因此，尿中常用于生物监测的多环芳烃代谢物主要是芘、萘、菲和麓等环数不大于4、由PAHs产生的OH．PAHs。J。尿液中多环芳烃代谢物的含量极低，且尿液成分较复杂，所含杂质可能对色谱柱造成损害，所以，直接进样不能满足分析要求。现有方法通常采用离线固相萃取减少基质干扰，提高检测灵敏度，但操作繁琐费时，重现性不理想，且固相萃取柱多

5、为一次性使用，人力与时间成本高。在线固相萃取(OnlineSPE)是近年发展起来的一种全自动样品前处理方式，具有富集纯化一步完成、固相萃取柱可多次使用、重现l生好、自动化程度高等优点，已被应用于食品、环境、生物等样品中痕量有机物的检测“。目前，测定OH—PAHs的方法主要有高效液相色谱一荧光检测法(HPLC．FLD)¨、气相色谱一质谱法(GC—MS)¨J、液相色谱一质谱法(LC．MS)¨∞J。其中，GC．MS法需要衍生，操作繁琐；LC—MS法仪器价格昂贵。而HPLC—FLD法仪器普及率高，测定OH—PAHs不需衍生，结合在线富集

6、技术甚至可获得比LC—MS法更高的灵敏度。本研究利用双三元液相系统，采用基于快速涡流色谱的TurboflowCyclone固相萃取柱对目标尿样进行在线富集纯化，将大分子杂质提前分离去除，延长了固相萃取柱使用寿命，进一步降低了交叉污染率，而以HypersilGreenPAH专用色谱柱对7种多环芳烃代谢物实现快速分离的方法也未见报道。利用本方法对实际样品(吸烟者和非吸烟者尿样)进行了测定。与文献[11，12，20]比较，本方法不需经传统的固相萃取纯化、富集及氮吹浓缩过程，样品经酶解、离心和过滤等操作过程，可直接进样测定，且方法灵敏度

7、比文献[11，12]高(除1一羟基萘外，检出限达nrVL水平)，准确度和重现性好，简单快速(包括固相萃取和色谱分析仅需2Omin)；在线固相萃取柱可重复使用，柱效高，分离度2014~8-31收稿；2014．10-23接受E-mail：sunehj@scu．edu．cn分析化学第42卷好，大大简化了样品前处理过程，分析成本大为降低，特别适合批量样品的分析测定。2实验部分2．1仪器与试剂Ultimate3000双三元液相色谱系统，配置SRD3600六通道真空脱气机，DGP3600双梯度分析型色谱泵，WPS3000TSL自动进样器，F

8、LD3400荧光检测器，TCC一3000柱温箱(配有1个六通阀)，变色龙色谱管理软件Chromeleon7．2SR1，HypersilGreenPAH柱(150mmX4．6mm，5Ixm)，TurboflowCyclone柱(50mmx1．0mm)；离心机，以上