三齿四唑型固定金属亲和色谱固定相的制备及性能.pdf

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1、？．１、？’Ｉ，分类号：０６５学校代码：１０６９７密级：公开学号；２０１２２０６００？善香如巧硕±亨恆巧交＇ＳＤＭＡＳＴＥＲＩＳＳＥＲＴＡＴＯＮＩ王齿四哇理固定金属亲和色谱固定相的制备及性能Ｉ学科义称：分析化学作者：白雷指导老师：卫引茂教授西北大学学位评定委员会二〇—五年西北大学学位论文知识产权声明书本人完全了解西北大学关于收集、。、保存使用学位论文的规定学校有权保留并向国豕有关部ｎ或机构送父论文的复印件和电子版。本人允许论文被查阅和借阅。本人授权西北大学可Ｗ将本学位论文的

2、全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社等机构将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》或其它相关数据库。保密论文待解密后适用本声明。学位论文作者签名：指导教师签名：．若名旅ＷＴ年／月日西北大学学位论文独创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西一北大学或其它教育机构的学位或证

3、书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢〇＇邑、学位论文作者签名：句＾ｆｒ年月日（摘要固定金属亲和色谱（ＩＭＡＣ）是基于固定相表面金属离子与生物大分子表面的组氨一酸残基之间的配位作用而建立的种生物大分子分离方法，目前已发展成为基因重组蛋一ＡＣ固ＡＣ白分离纯化最有效的工具之。然而ＪＭ定相表面的金属离子容易流失导致ＩＭ一的产业化应用受到了限制。至今，增强固定相金属离子的稳定性，般是通过增加固定相配基配位数的途径来实现。但是，配基配位数过多，会导致中也金属离子与蛋白质表

4、面的组氨酸残基配位作用被削弱；而配位数过少时，配基与金属离子配位不稳定，造成金属离子的流失。因此，如何设计配位能力强同时又不削弱蛋白质与金属离子之间的作一用力，是ＩＭＡＣ固定相丽基设计的关键。本文设计了种Ｈ巧四嗤型固定金属亲和色谱配基，Ｗ期在不增加配基配位数的条件下降低金属离子流失率。全文共分为两个部分；’’－－５－（１）Ｈ齿型Ｎ，Ｎ２（甲基四哇腿化ＭＴＡ）固定金属亲和色谱固定相的制备及＂－性能－２。大孔括胶先后与韦氯型癌焼化试剂、３氨基艺基胺、漠乙腊反应，最后用点（）＂ＴＡ－Ｓ义击反应制备了ＢＭｉ〇２固定相。用射线光电子能谱表征

5、了固定相的结构。Ｗ核糖核酸酶Ａ、细胞色素Ｃ与溶苗酶为模型蛋白，研究了流动相ｐＨ值、竞争洗脱剂浓度ＣｕＩＩｎｎ对蛋白质在（）、Ｎｉ（和Ｚｎ（）固定相上保留时间的影响。；种蛋白质的保留时间随）ｐＨ的增加而增加，随味嗤浓度增加而降低，蛋白质与金属离子的藝合强度遵循ＣｕＩＩ＞ＮｉＩＩ＞ＺｎＩＩ的次序，证明蛋白质在该固定相上的保留遵循ＩＭＡＣ机理ＩＩ（）（）（）。发现Ｍ（）ＢＭＴＡ－－３从引化上的流失率明显低于经典的瓜Ａ固定相。采用Ｂ３ＬＹＰ／６１Ｇ量子计算法描述了ＢＭＴＡ配体、金属离子、蛋白质表面的组氨酸残基之间的配位模式。最后，用一－

6、ＢＭＴＡＳＮｉＩＩｉ〇２柱从大肠杆菌裂解产物中步分离纯化了组氨酸标签的天蚕抗菌化Ｂ（）—－纯度至少９０％人表皮生长因子（ＣＢＥＧＦ）融合蛋白，１＾上。研究结果表明，ＢＭＴＡ－Ｓ记２柱能够用于蛋白质的分离纯化，且具有ＮｉＩＩ离子流失率低的特点。（）（２）新型氨基双四哇（ＢＴＡ）重金属离子吸附剂的制备及性能研究。将二腊胺配基＂＂键合到氯甲基化的聚苯乙稀微球表面，继而用点击化学制备ＢＴＡ吸附剂。用红外光谱表征了吸附剂的结构；用静态吸附法研究了ＢＴＡ吸附剂对Ｃｕ（ＩＩ）、ＰｂＩＩ的吸附热（）力学、动力学性能。结果表明，新型吸附剂吸附容量和吸

7、附时间与传统树醋相当。吸附一选择性及应用有待于进步研究。关键词：固定金属亲和色谱，固定相，四巧类配体，蛋白质分离，金属离子流失ｉＡｂｓ仕ａｃｔＩｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｍｅｔａｌｉｏｎａｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｈａｓｂｅｅ打ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂＰｏｒａｔｈｓｉｎｃｅｇｐｙｙ１９７５，ｂａｓｉ打ｇｏｎｔｈｅａｆｉｎｉｔｙｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆｈｉｓｔｉｄｉｎｅｒｅｓｉｄｕｅｓｅｘｐｏｓｅｄｃｍｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆｂｉｏｌｏｉｃａｌｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄｍ

8、ｅｔａｌｉｏ打ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｏ打化ｅ