天津地区HEV动物宿主及其基因型的研究.pdf

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1、分类号：R392学校代码：10062密级：学号：2012804005硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：天津地区HEV动物宿主及其基因型的研究TITLE:TheanimalreservoirandgenotypeofHEVinTianjin一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：张华导师：张学军天津医科大学研究生院二〇一六年五月分类号：R392学校代码：10062密级：学号：2012804005学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’S

2、DISSERTATION论文题目：天津地区HEV动物宿主及其基因型的研究TITLE:TheanimalreservoirandgenotypeofHEVinTianjin一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：张华导师：张学军天津医科大学研究生院二〇一六年五月中文摘要目的1.选择天津市不同区县的猪、牛、羊、兔和狗作为研究对象，调查这些与人类生活密切相关的动物血清中HEV抗体的流行情况；2.对采集的动物粪便标本进行RNA检测，并对检出的动物HEVRNA进行基因型和亚型分析，从而对动物HEV与人

3、类的HEV流行和传播的相关性进行进一步阐释。方法1.在天津市武清区和宝坻区屠宰厂收集猪血液标本202份，牛血液标本97份，羊血液标本163份，武清区、宝坻区和西青区三个农贸市场收集兔血液标本78份，北辰区和西青区宠物医院收集狗血液标本188份，每份标本1-2ml。所有标本均低温保存迅速运送到实验室，分离血清，-20℃冷冻保存备检。使用北京万泰生物药业有限公司生产的双抗原夹心酶联免疫检测试剂盒检测动物血清标本中抗-HEVIgG抗体。2.将天津市武清区和宝坻区屠宰厂收集的202份猪血液标本，78份兔

4、血液标本，使用戊型肝炎病毒IgG抗体诊断试剂盒（上海B公司）进行二次检测，将检测结果与北京A公司生产的双抗原夹心酶联免疫检测试剂的检测结果进行比较。3.对天津市武清区、西青区和宝坻区收集到的60份猪粪便标本、50份兔粪便标本、50例狗粪便标本进行HEVRNA检测。用逆转录巢式PCR（RT-nPCR）检测戊型肝炎病毒核糖核酸（HEVRNA），并对PCR阳性扩增产物进行克隆测序（北京诺赛基因组研究中心有限公司），用Bioeditv7.0.9和MEGA6.0软件按目前新的分型方法所选用的参考序列进行核

5、苷酸序列相似性比较和生物进化树分析。结果1.天津地区屠宰场猪血清中抗-HEV阳性率为77.2%（156/202）；牛血清中抗-HEV阳性率为7.2%（7/97）；羊血清中抗-HEV阳性率为6.1%（10/163）；I兔血清中抗-HEV阳性率为16.6%（13/78）；狗血清中抗-HEV阳性率为18.6%（35/188），其中流浪狗血清中抗-HEV阳性率为33.7%（29/86)，宠物狗血清中抗-HEV阳性率仅为5.9%（6/102）；总体阳性率为30.3%（见表1）；流浪狗血清抗体水平为2.67

6、±1.23，宠物狗血清中抗体水平为0.58±0.39，两组数据存在显著差异(P<0.05)。2.上海B公司生产的戊型肝炎病毒IgG抗体诊断试剂盒阳性率低于北京A公司生产的抗-HEV抗体检测试剂盒，两种试剂符合率为95.7%（268/280）（表4），检测结果具有一致性。3.天津地区猪粪便标本的HEVRNA阳性率为6.7%（4/60），阳性标本分别命名为sw-tj11、sw-tj17、sw-tj46、sw-tj48。其中sw-tj11与4g亚型相似性最高，sw-tj17与4a亚型相似度最高，sw-

7、tj46、sw-tj48与4d亚型相似度最高，这两株之间相似度为99%，应该为同一病毒株感染；兔粪便标本的HEVRNA阳性率为4%（2/50），阳性标本分别命名为R-tj3、R-tj9，与基因3型的参考序列相似度为74%-90%，属于基因3型；50例狗粪便悬液HEVRNA检测结果全部为阴性。结论1.本次调查研究结果显示天津地区与人密切接触的五种动物总体抗HEVIgG抗体阳性率为30.3%（221/728），五种动物均存在HEV的感染，且猪、狗、兔的自然感染比例较高，但人与这些动物密切接触是否会感

8、染HEV需要进一步研究。2.调查结果显示流浪狗血清中抗HEV-IgG抗体水平与宠物狗抗HEV-IgG抗体水平存在显著差异，流浪狗HEV传播情况明显要比宠物狗严重。3.北京A公司的试剂盒阳性率略高于上海B公司的试剂盒，两种试剂具有良好的符合率。4．天津地区存在基因4型猪HEV流行和基因3型兔HEV流行。关键词：戊型肝炎病毒动物宿主基因型基因亚型戊型肝炎病毒抗体IIAbstractObjectives1.TostudythepotentialHEVanimalreservoirsandthecurr