《微生物的实验室培养要点分析》.doc

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1、《微生物的实验室培养要点分析》张建尚/江苏培养基1.培养基的种类划分标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入凝間剂（如琼脂）较多菌种分离、鉴定、计数半固体培养基加入凝固剂（如琼脂）较少观察微生物运动、分类液体培养基不加入凝固剂工业生产化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业大规模生产目的用途家别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加或缺少某种化学成分菌种的分离2.培养基的成分备种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种营养物质。满足微生物生长还需要适宜的pH、氧气

2、的要求、特殊营养物质等。特别提醒：%1C02是白养微生物的碳源，异养微生物只能利用有机碳源，单质碳不能作为碳源。%1毗是硝化细菌的氮源，也能为硝化细菌的化能合成作用提供能量。只有固氮微生物才能利用2。%1在充足的碳源、氮源、无机盐和水等条件下，有些微生物仍不能正常生长，还需要额外补充一些有机物，如氨基酸、维生素和碱基等，这些微生物生长不可缺少的微量有机物叫做生长因了，是微生物的特殊营养物质。二、无菌技术1•消毒与火菌的方法方法操作过程应用范围消毒煮沸消毒法100°C煮沸5〜6min口常生活屮广泛使用巴氏消毒法70〜75°C煮30min或80°C煮15min牛奶、啤酒、

3、果酒和酱油等不宜进行高温消毒的液体化学药剂消毒法酒精、碘液涂抹，来苏水喷洒、添加漂白粉、高猛酸钾等用于皮肤、伤口、动植物纟R织表面、水源、空气、手术器械等消毒紫外线消毒法39W紫外灯照射30min接种室空气等灭菌灼烧灭菌法酒精灯火焰灼烧接种环、接种吿1■等金属制品，接种过程屮试管口、锥形瓶口等干热灭菌法干热灭菌箱内160〜170"C加热1〜2h耐高温且需要保持干燥的玻璃器Jill.金属用具等高压蒸汽灭菌法lOOkPd、121°C维持15〜30min耐高温、高压及不怕潮湿的物品间歇灭菌法100°C下蒸煮30〜60min,连续重复3d,每天1次不耐热培养基的灭菌2.消毒与

4、灭菌的比较比较项理化因索的作用强度消灭微生物的数量芽砲和抱了能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能特别提醒：高压蒸汽火菌要特别注意的问题，一是加热升温使水沸腾，并由小至大打开排气阀，排除冷空气，继续加热升温，再关闭排气阀；二是保压到规定时间Z后，就停止加热，缓缓排气，待其压力下降至零时，方可开盖取物。三、制备牛肉膏蛋白豚固体培养基方法步骤：计算f称量f溶化f调pH-灭菌f倒平板特别提醉：%1牛肉膏比较黏稠，可以用玻璃棒挑取，放在称量纸上称量。%1溶化时不得使用铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基屮，使细菌不易生长。%1在烧杯屮溶化时，可先

5、用温水加热并随时扰动，以防糊底而导致烧杯破裂。%1培养基灭菌后要冷却到50°C左右才能倒平板。%1倒平板时要防止微生物污染，将培养1U1放在酒精灯火焰旁的桌面上，装有培养基的锥形瓶口迅速通过火焰。%1培养基不能溅到1UL盖和皿底之间的部位,防止杂菌滋生。%1平板冷却凝固碍要将平板倒过来放置，有利于水分的挥发和防止川1•盖的水珠落入培养基上。四、纯化大肠杆菌1.平板划线法(1)几次烧灼接种环的目的：①取种Z前：杀死接种坏上的微生物；②每次划线Z前:杀死上次划线示接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种有•接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少；③划线结束：杀死接种环

6、上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。(2)从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。特别提醸：%1整个过程祁要在酒精灯火焰旁进行。%1划线时不能将培养皿盖完全打开，也不能划破培养基。一旦划破培养基，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的日的或存胡在划破处的单个细胞无法形成规炬的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。%1在烧灼接种环Z后，要等冷却后再划线，以防温度太高杀死菌种。2.稀释涂布平板法(1)样品的稀释一般采用十分Z—稀释法，制成lol1CT5、10~10-

7、10~1(T等一系列稀释菌液。(2)稀释涂布平板法各个细节均需保证无菌操作，注意酒精灯与培养MIL的距离要合适,吸管头不要接触任何其它物体，吸管要在酒精灯火焰周囤使用。涂布器先要在酒精屮浸泡,然后再在酒精灯火焰上烧灼。特别提醉：%1待测菌稀释度的选择应根据样品确定，通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10=10~1(T稀释度，测定土壤细菌数量时,采用101101(T稀释度，测定放线菌数量时,采用101010"稀特度，测定真菌数量时，采用101010"稀特度。%1平板划线法主要用于微生物的分离，稀释涂布平板法用于微生物的分离和计数。%1稀释涂