血涂片、红细胞形态.ppt

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1、外周血细胞形态学检验1.血涂片的制备：手工推片法2.血涂片的染色：瑞氏染色法3.红细胞的形态检查将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载玻片上，经染色后在显微镜下检查，是血液细胞形态学检查的基本方法，临床应用广泛，特别是对于各种贫血及血液病的诊断和鉴别诊断具有重要价值。血涂片（bloodsmear）的制备1.新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。3.使用时切勿用手触及玻片表面。载玻片的清洁血涂片的制备2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去染料和油污。手工推片法灰白层涂片法血涂片的制备方法血涂片的制备薄血涂片法厚血涂片法自动血液涂片法＊＊手持玻片推制血膜推片用推片从血滴前方接触血滴推片角度吸附血

2、液成一线推完血片，迅速干燥手工薄血推片法厚薄适宜，头体尾分明，细胞分布均匀，边缘整齐，两边和两端留有一定空隙。良好血涂片的标准血涂片的制备血滴越大，推片角度越大，速度越快，血液粘度越高，则血膜越厚。血滴越小，推片角度越小，速度越慢，血液粘度越低，则血膜越薄。如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜的厚薄合适？对于严重贫血患者，应如何推制血片？影响血膜厚薄的因素血涂片的制备角度大,速度快,太厚,太短推制适当的血膜推片不光滑，呈毛刷状用力不均，呈搓板状血量过多，无尾玻片油腻，有空泡1.灰白层涂片法抗凝血离心，取灰白层涂片。用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑狼疮细胞(LEC)检查。其

3、他方法血涂片的制备2.厚血涂片法用于疟原虫、微丝蚴的检查血涂片的染色染色的目的是使细胞膜、细胞浆、胞浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定的颜色，以便于显微镜下观察与识别。一、瑞氏染色法（Wright’sstain）二、吉姆萨染色法（Giemsa’sstain）三、瑞氏-吉姆萨复合染色法血涂片的常用染色方法对胞浆和中性颗粒染色较好，对胞核稍差。对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄生虫着色较好。取二者之长，染色效果好。瑞氏染色法染料：酸性染料伊红和碱性染料美兰（亚甲蓝）的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天青。溶剂：甲醇。溶解+固定。磷酸盐缓冲液（PBS）：pH6.4～6.8染色原理1.血

4、红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，与酸性伊红结合染成粉红色，称为嗜酸性物质。2.嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性美兰结合，染成紫色或蓝色，称为嗜碱性物质。3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合，染成紫红色，称为中性物质。pH对细胞染色的影响在酸性环境中染色偏红；在碱性环境中染色偏蓝。因此要求用磷酸盐缓冲液，使染色环境维持在6.4～6.8之间，以达到满意的染色效果。1.用玻璃笔在血膜两端划线。2.瑞氏染液覆盖血膜，染0.5～1min。3.加等量或稍多的缓冲液，混匀，染5～10min。4.流水冲去染液，干燥后镜检。染色步骤瑞氏染色法正常血膜外观为淡紫红色。镜下RBC和嗜酸性颗粒

5、染粉红色，嗜碱性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红色，细胞核染紫红色。染色结果瑞氏染色法5.若有染料残渣，可用少量甲醇溶解，并立即用流水冲洗。1.血膜正面朝上，干透后再染色。2.染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。3.染色过程中防止蒸发沉淀。4.冲洗时应以流水冲洗，冲洗时间不能太久。注意事项瑞氏染色法6.复染时应先加缓冲液再加染液，或加染液与缓冲液的混合液。质量控制瑞氏染色法1．载玻片要清洁。2．制备良好的血涂片。3．选择抗凝剂。4．处理白细胞浓度较低的标本。5．血细胞比容与涂片关系。6．新配置染液的处理。7．染色过深、过浅的处理。红细胞形态检查在贫血或其他血液系统疾病时红细胞除

6、有数量变化外，往往伴有形态改变，表现在红细胞大小、形状、染色性质和内涵物的异常。因此，红细胞形态检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要的临床价值。红细胞形态检查方法低倍镜：油镜：制备血涂片染色镜检检查区域：体尾交界处，细胞分布均匀，红细胞紧密排列但不重叠。估计细胞分布和染色情况，浏览全片是否存在异常细胞。观察红细胞形态。正常红细胞形态双凹圆盘形，淡桔红色，中央1/3为生理性淡染区，呈正常色素性。红细胞直径为6.7～7.7μm，平均直径7.2μm左右，厚约2μm。无核，胞质内无异常结构。除健康人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和部分白血病。正常红细胞形态异常红细胞形态红细胞大小异常红细

7、胞形状异常血红蛋白充盈度与着色异常红细胞内出现异常结构红细胞排列异常有核红细胞红细胞大小异常1．小红细胞(microcyte)：直径<6μm。血片中出现大量的染色过浅的小红细胞，提示血红蛋白生成障碍，常见于缺铁性贫血（IDA）、珠蛋白生成障碍性贫血。遗传性球形红细胞增多症（HS），血红蛋白充盈良好，生理性中心淡染区消失。小红细胞(microcyte)红细胞大小异常2．大红细胞(macrocyte)：直径>10μm。最常见于缺乏叶酸和维生素B12所致的巨幼细胞性贫血（MA）。也可见