The promotion of cerebral ischemia recovery in rats by laminin.ppt

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1、Thepromotionofcerebralischemiarecoveryinratsbylaminin-bindingBDNF层粘连蛋白结合脑源性神经营养因子促进大鼠脑缺血复苏中国科学院遗传与发育生物学研究所来源《生物材料》（Biomaterials）(Doi:10.1016/j.biomaterials.2011.03.072）脑缺血（脑梗塞）是由于脑动脉狭窄加重或完全闭塞，导致脑组织缺血、缺氧、坏死，从而引起神经功能障碍的一种脑血管病。脑缺血是很常见的中枢神经损伤，其主要致病因素有：高血压病、冠心病、糖尿病等，多见于45～70岁中老年人。生存下来的脑缺血损伤病人大

2、都会有后遗症，影响正常生活，严重的脑缺血病人生活不能自理甚至危及生命安全。中枢神经再生是再生医学的研究热点之一。病况简洁脑源性神经营养因子（BDNF）对神经元的缺血性损伤具有防治作用,可望成为新一代的缺血性脑血管病的有效治疗药物。但因BDNF属蛋白质大分子物质,难透过血脑屏障,为此影响了其临床应用。层粘连蛋白(Laminin）一种丰富的细胞外基质。在中枢神经系统中，脑缺血后在缺血区域高度表达。我们这里融合层粘连蛋白结合域（laminin-bindingdomain，LBD,NtA插入pET-28a形成PET-LBD)和BDNF形成LBD-BDNF。LBD-BDNF可以针对

3、累积层粘连蛋白，在缺血区，发挥靶向治疗缺血损伤后神经元。名词介绍LBD-BDNF的构造GeneofNtAwasconstructedandinsertedintopET-28a(Novage,SanDiego,CA)toconstructpET-LBDasdescribedbefore.AhumanBDNFDNAwasamplifiedbyPCRasdescribedbefore.TheBDNFDNAfragmentswereinsertedindividuallyintopET-LBDandpET-28atoconstructtheexpressionvectorsfo

4、rBDNFwithLBD(pET-LBD-BDNF)orwithoutLBD(pET-NAT-BDNF).E.coliBL21(DE3)strain-carriedpET-LBD-BDNForpET-NAT-BDNFwerecultured.检测纯化Theexpressionofrecombinantproteinswasanalyzedbyelectrophoresisona15%(wt/vol)sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis(SDS-PAGE)underreducingconditionandw

5、estern-blottingwithmouseantibodytopolyhistidine(1:1000dilution;Sigma).ThepurifiedNAT-BDNForLBD-BDNFwasrefoldedintheglutathioneredox-refoldingsystem,andstoredat−80°C.模拟体外电泳分析层粘连蛋白结合能力通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定纯化的NAT-BDNF和LBD-BDNF。使用ELISA分析以确定是否LBD-BDNF具有层粘连蛋白结合能力。在每个指示的点，在OD405nm处的LBD-

6、BDNF为显着高于的NAT-BDNF，表明LBD-BDNF对层粘连蛋白结合能力大于NAT-BDNF体内外科手术（封堵装置送到前动脉）对大鼠脑缺血模型的永久性大脑中动脉闭塞（MCAO），制备了大鼠大脑中动脉堵塞的脑缺血模型24只大鼠control组NAT-BDNF组LBD-BDNF组层粘连蛋白在体内的结合分析神经元退化分析一周后，LBD-BDNF治疗组脑缺血大脑半球的梗塞面积显著减少；四周后，海马区域神经发生明显增强，神经行为能力明显恢复。这一系列结果表明：LBD-BDNF可以通过结合于脑缺血部位的层粘连蛋白来发挥其定向的神经营养作用，促进脑缺血损伤的恢复。总结这项工作是对

7、脑缺血损伤治疗方法的新探索，为缺血损伤后神经再生提供了新思路。该治疗思路也可用于探索对帕金森氏症等神经退行性疾病的治疗。谢谢观赏