拟南芥脲酶辅助蛋白AtureG基因的功能解析.pdf

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1、学校代码：１０２２５学号；Ｓ１６５１７学化冷文拟南芥脈酶辅助蛋白心ｗｒｃＧ基因的功能解析寇靖ｈ臟副教授就林业大学：硕±学科专业申诸学位级别：生物化学与分子生物学论文提交日期：２０１６年４月论文答辩日期：２０１６年６月１２日授予学位单位：东北林业大学授予学位日期：２０１６年６月答辩委员会主席；论文评闽人：从抑寺乂聲．束＇．—二－－．——学校代码：１０２２５学号；Ｓ１６５１７学佐冷丈拟南芥脈酶辅助蛋白基因的功能解析寇蜡柳＃奎教Ｓ

2、东北材：业大学旦斯，而化么ｈ媛媛副纖斜佩业大学申请学位级别：硕±学科专处：生物化学与分子生物学论文提交日期：２０１６年４月论文答辩日期：２０１６年６月１２曰；２０１６授予学位单位：东北林业大学授予学位日期年６月答辩委员会主席：论文评阅人：、將４乂争乐扯ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ；Ｓ１６５１７ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｇＦｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆＡｒａｂｉｄ

3、ｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａｕｒｅａｓｅａｃｃｅｓｓｏｒｙｒｏｔｅｉｎＡｔｕｒｅＧｅｎｅｐｇＣａｎｄｉｄａ化：ＪｉｎＫｏｕｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＳｈｅｎｋｕｉＬｉｕＡｓｓｏｃｉａ化Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ａ．Ｐ．ＹｕａｎｙｕａｎＢｕＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅＡｐｐｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＤａ化ｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅ２０１６，Ｕｎｉｖ

4、ｅｒｓｉｔｙ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ摘要摘要盐胁迫导致农作物产量降低的现象普遍存在。盐胁迫在种子萌发时期对于种子来说ｅｏ一尤为敏感。脈酶（ｗｓｅ）是个依赖辕离子的金属酶，在大多数植物和微生物体内用＾＾分解尿素。在尿素代谢中，脈酶水解尿素生成氨和二氧化碳。在拟南芥说ａ化ｍａ）中，催化脈酶生物活性需要镶离子和Ｈ个辅助蛋白（ｍｗＤ、ｗｅＦ、ｗｅＧ）的参与。Ｈ个脈酶辅助蛋白基因的表达特性分析结果表明，Ｈ个脈酶辅助蛋白基因在拟南芥的各个器官中均有表达，且在果夹中表达量

5、最大；在种子萌发时期，公和在吸胀过程中表达量都明显下调表达，而处ｗｅＧ基因则上调表达；在种子萌发后期，ＮａＣｌ胁迫和ＮＨ４ＣＩ处理下，Ｈ个脈酶辅助蛋白均受到诱导表达，但在表达谱上＾化ｗＺ）和知ｗｅＦ基因的表达特性有着商度的相似性，心ｗｅＧ在表达谱上不同于其他两个基因，所Ｗ本研究中Ｗ心ｗｅＧ为研巧对象进行Ｗ下研究。利用ＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等手段对ＡｗｅＧ基因缺失突变体在ＤＮＡ和ＲＮＡ水平进ｅ－ａｆＭｗＧ－行鉴定并得到了分别为外显子插入（ａｆｗＧ／、ＣＳ３５２３９８）和内含子插入（２、ＣＳ３５

6、２３５０）的两个纯合突变体。Ｗ野生型拟南芥和脈酶基因缺失突变体（如ｗｅａｓｅ）作为对照－八均未检，腺酶活性分析的结果显示所得到的两个纯合突变体（ａｆｉｗＧ测到脈酶的活性ｅ－俯ｗＧ－。对野生型拟南芥、如ｗＧ７和２在盐等逆境处理下的表型分析－ｆ－，在ＮａＣｌ胁迫处理下ｗｅＧ／和ａ化ｒｅＧ２可，结果蟲示，ａ提高对盐胁迫的抗性根长和－鲜重都显著性島于野生型ｅ、ａｆｗｅ－；在过量的ＮＨ４ＣＩ处理下，ａｆｗＧ／Ｇ２与野生型相比一－突变体在鲜重上略有优势。进步对拟南芥賢生型、ａ化ｗＧ／和植株体内的尿＋－－素含量和ＮＨ含量

7、进行了测定。研究结果显示：盐胁迫处理下ｒｅＧ／ｅＧ２４，ａｆＭ和ａｆｗ＋一体内的尿素含量高于野生型。，，而ＮＨ４含量则低于野生型最后为了进步了解如ｗＧ基因在拟南芥ＧＥＸ－６－３－ｅ植株体内的作用机制，我们构建了ｐｐｖ４化ｗＧ载化并对其蛋白进行了诱导和纯化。结果得到了纯化后的ＡｔｕｒｅＧ蛋白。为今后在蛋白水平上的研究打下坚实基础。关键词拟南芥；ＡｔｕｒｅＧ；萌发期；盐胁迫；氨积累；巧活性－－１ＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔｒａｃｔＳａｌｔｓｔｒｅ巧Ｋｓｕｌｔｅｄｉｎｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅ

8、ｏｆｃｒｏｐｉｅｌｄ．ＳａｌｔｓｔｒｅｓｓｉｓａｒｔｉｃｕｌａｒｌｓｅｎｓｉｔｉｖｅＵ）ｔｈｅｙｐｙｓｅｅｄｄｕｒｉｎｇｔｈｅｅｒｉｏｄｏｆｓｅｅｄｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｕｒｅａｓｅ（ｚ／化幻文ｅ）ｉｓｄｅｅｎｄ