实验五 鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价.ppt

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1、实验五鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价一、实验目的1、掌握鸡新城疫的临诊要点。2、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。二、实验内容1、鸡新城疫的临诊要点。2、鸡新城疫的实验室诊断。3、鸡新城疫的免疫效果评价。HA和HI的原理1、HA试验：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受体结合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象。2、HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称HI试验。1、鸡新城疫的血凝试验(HA)【材料】新城疫病毒鸡胚接种尿囊液1份0.6％鸡红细胞悬液1管生理盐水

2、或PBS1瓶96孔微量血凝板1块微量加样器1支【病毒血凝试验的操作方法】孔号123456789101112病毒稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048对照生理盐水505050505050505050505050病毒液50505050505050505050500.5%红细胞505050505050505050505050微型振荡器1min，静置30min弃50结果观察+++++++++++++++++++++++++++++++++--以100%凝集的病毒最大

3、稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位单位：L置于振荡器上振荡1分钟，静置后30min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100%凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。【结果判定】2、鸡新城疫的血凝抑制试

4、(HI)【材料】除血球凝集试验所用材料外，血清取鸡免疫血清或者取高免卵黄抗体。【病毒血凝抑制试验的操作方法】弃50以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。单位：L以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。从表4-2看出，该血清的HI效价为1:64，用以2为底的负对数(-log2)表示，即6log2。【结果判定】1、免疫鸡群发生新城疫流行有何特点？2、简述确证新城疫的实验室诊

5、断方法。3、记录并分析HA、HI实验的结果。4、进行HA、HI实验时有哪些注意事项？作业