氨基酸分析系统.doc

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1、戴安公司AAA-Direct氨基酸分析系统一、实验设备及试剂1.仪器1)BioLCGS50带脱气功能分析泵+LA(P/N059493)2)LC30/LC25柱温箱3)ED50A/ED50电化学检测器4)安培池AAA-CertifiedElectrochemicalCell带金工作电极，其中,LC30(P/N055828);LC25(P/N055827);AS50(P/N055826)5)AminoPacPA102mmCoIurnn(P/N055406)6)AminoPacPA102mmGuardColumn(P/N055407)7)Peaknet6色谱

2、工作站8)AAA-DirectInstallationKit(P/N059539)2.试剂1)50%NaOH优级纯2)醋酸钠(P/N059326)3)18种氨基酸标准溶液4)高纯水(电阻21&0MQQ)5)pH试纸(广泛)二、仪器安装1.连接仪器，2.将GS50/GP50泵头的所有内径为0.01mm的黑色peek管全部更换为内径为0.005mm棕色peek管。如果使用GP50泵,还需要在泵的主菜单内将设定的流速100u1改为25ul。或使用戴安公司LowDelayVolumeConfigurationConversionKit(P/N056967)进行改

3、装。3.安装色谱工作站软件4.用去离了水开机，排除各通道内的气泡5.使川25ul的进样管，进样管过人会使分离度卜•降6.检测池出口使用黑色peek管三、淋洗液的配制1.50%NaOH储备液一称取50克优级纯NaOH加入50mL去离子水定溶至100毫升，储存于一塑料瓶内保存。2.2NNaOH500mL取52mL50%NaOH定容至500mLo3.0.25OMNaOH一取13.lmL50%Na0H至1升容量瓶中,用去离子水定容至刻度并立即盖上瓶塞，以防吸入二氧化碳。4.1.0M醋酸钠一于750mL去离子水中溶解82.04克醋酸钠,完全溶解后用水定容至1升。建

4、议此淋洗液最好用0.2uni滤膜过滤。四、pH参比电极标定液1.pH=7.0将50mL0.1MKH2PO1和29.1mL0.IMNaOH置于lOOmL容量瓶中,定容至刻度。2.pH=10.0将50mL0.05MNaHC03和10.7mL0.IMNaOH置于lOOmL容量瓶中,定容至刻度。其中:0.IMKH2P04称1.3609克定容至lOOmL;0.05MNaIlCO.3称0.4201克定容至lOOmL;0.IMNaOH称0.4000克定容至100mL;五、氨基酸标准溶液1.0.IMHCL含20mgNaN3/L氨基酸稀释液2.用氨棊酸稀释液稀释氨棊酸标准

5、浓度至或lOuMo此溶液放在冰箱内口J保存1周，在室温下，可保存48小时。六、系统清洗1.用2NNaOH清洗所有-需要使用的淋洗液瓶、泵头管路，至少使用40mLo清洗液H泵头处直接排出(此时色谱柱暂不安装)。2.川去1&0MQ去离子水冲洗系统30分钟。七、安装淋洗液瓶1.将淋洗液El、E2、E3分别加到淋洗液瓶内，立即通入高纯氮气，密封保存。2.分别排除各淋洗液通道内的气泡，以保证系统压力稳定。3.用新配制的淋洗液清洗每一通道和比例阀，体积不少于30mL,时间约至少12分钟。4.淋洗液瓶内不安装过滤头。八、系统平衡1.按照氨基酸分析的淋洗液色谱条件，开泵

6、川淋洗液(76%/24%)(A/B)平衡系统，并打开检测池的开关。选择pH测量模式。此时pH读数应在12.T13.0之间。如果不在此范围内，则需要检査淋洗液的比例是否正确(76%/24%)(A/B)o如果淋洗液正确，则需要重新校正参比电极。2.系统平衡30分钟后，背景信号应＜90nC,大于此数，建议用2NNaOH重新冲洗系统。九、在PeakNet6中输入所使用的波形和梯度程序。见表1,农2十、在PeakNet中运行氨基酸分析方法，开始分析。见图1.十一、注意事项1.在安装色谱柱、管路、配制淋洗液和分析的过程中都应戴表而无滑石粉的塑胶手套，以防止沾污。2.

7、所有实验用水的纯度都应达到18.0MQ。3.所便用的NaOH淋洗液必须要用50%NaOH液体配制。4.淋洗液最好要真空脱气，或用经过煮沸的高纯水配制。图1.氨基酸标准分析谱图进样体积：25M标准：NIST=2.5Mmol/mLin0.1MHC1溶液稀释标准（用去离了水）：色谱柱：20nmol/mLAminoPacPA10分离柱与保扩"柱(2mm)柱温：30°C系统操作反压：<3,000psi淋洗液:El:去离了水E2:250讪NaOHE3:1M醋酸钠淋洗液流速：0.25mL/minED50操作参数：AAAAu工作电极;pll参比电极；电位波型见表1.梯度

8、淋洗：见表2.色谱峰1-精氨酸(Arginine);2-赖氨酸(Lysine);