花色色素分析实习

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1、实习“花色”第八学期园艺学対于花色色谱來说有三类结构完全不同的物质：类黄酮、类胡萝卜素和甜菜碱。其中类黄酮特别是花青索是最重耍的花色素。关于类黄酮生化和遗传学方面的细节在附件一屮集屮列举。I.萃取和鉴定花青素昔、花青素和其他类黄酮花青素和其他类黄酮可以利用1%的甲醇盐酸（l%MeOH/HCl=97mlMethanol+3ml36%HC1）从花瓣或者其他植物部位萃取出来。为了防止花青素降解，萃取最好在暗处和4°C条件下进行。盐酸能够使花青索稳定。根据需要和可支配时间不同可以选择主动和被动萃取方法。（1）主动（快速）萃取：将部分含有花青素的植物组织和少量1%的MeOH/HCl一块在离心管里

2、面弄碎（用小铲子）或者在研钵里而捣碎，纟H织残渣可以选择离心去掉。优点：■快速萃取-得到浓缩的花青素苹取物，可以立即用来进行分光光度计检测或者色谱检测缺点：■对于定量分析來说不是十分精确，或许不是所有的色素能够被同时萃取出來■对于大量样本的试验来说，消耗大量的操作时间（2）被动（慢速）萃取：将含有花青索的组织放在密封良好的器皿里而（离心管、烧瓶等）用1%的MeOH/HCl淹没，然后放在4度暗处（冰箱里面）几天甚至几周萃取优点：■大量样本时减少萃取操作时间■可以进行定性分析，例如1克花放在20-40ml1%的MeOH/HCl里面萃取大约40个小时，随厉可以用分光光度计来测量其禽量缺点：-

3、萃取时间长-萃取物需要一般悄况下需要在旋转蒸发仪里面浓缩后才能用來进行色谱分析。被动萃取同样对于其他类黄酮（例如黄酮醇、黄酮、黄烷酮、二轻黄酮醇）的提取具有优势。尽管他们的萃取液不是1%的MeOH/HCl而是乙酸乙酯（Ethylacetat-EtoAc）.这样的话在其他类黄酮被萃取出的时候，花青素就能保留在水相里而。不管哪种萃取方法，萃取物都可以在4度暗处超过一个月甚至一年保存。被萃取的植物组织应该在保存前去掉（离心、过滤）。实习内容：・用1%的MeOH/HCl主动和被动萃取一种植物两个品种（系）不同花色的花・用MeOH（不含盐酸）被动萃取这些甜系・用EtoAc（CH3C00C2H5）

4、被动萃取这些品系II.分光光度计检测类黄酮在600nm和2（）（）nm区域附近具有两个吸收峰的特征谱，一个在可见光区域（峰I）,另一个在紫外区域（峰II）。在用1%的MeOH/HCl萃取的Anthocyanin及Anthocyanidin峰I的吸收值为天竺葵素Pelargonidin（Pg）:520nm,Pelargonidin-Glycoside:505-512nm矢车菊素Cyanidin(Cy):535nm,Cyanidin-Glycoside:523-528nm飞燕草素Delphinidin(Dp):545nm,Delphinidin-Glycoside:535-538nm峰II

5、一般情况下吸收高峰位于275nm0其他类黄酮的吸收光谱人多数是衣纯甲醇里面测量，其屮列举下述吸收值：对于黄酮醇Flavonol(例如山蔡酚Kaempferol(Km),{M皮素Quecetin(Qu),杨梅素Myricetin(My))和他们的糖昔(Glycoside)来说,峰I位于350nm和380之间,峰II位于266nm和275nm之间。对于黄酮Flavone(例如芹菜素Apigenin(Ap),木犀草素Lueolin(Lu))以及他们的糖昔来说，峰I位于330nm和350之间，峰II位于270nm附近。二氢黄酮醇Dihydroflavonol(例如Dihydrokaempfer

6、ol(DHK),Dihydroquercetin(DHQ),Dihydromyricetin(DHM))只在紫外区域290nm处有一个吸收峰。黄烷酮(例如柚皮素Naringenin(Nar),圣草酚Eriodictyol(Eri))也只在288nm含冇一个峰。吸收光谱需要在紫外对见分光光度计测暈。测量通过在600nm和200nm之间对比类黄酮萃取液和溶液的光吸收差别进行(Extinktion)□测量必须用石英比色杯，因为蜩料比色杯不适于测量用，因为塑料木身在紫外区域也有吸收。作业：(1)测量特定类黄酮的吸收光谱。天竺葵素、飞燕草素、矢车菊素以及他们的糖甘及山荼酚、懈皮索、芹菜索、木犀草

7、索的原液(1mg/mll%MeOH/HCl)作测量用。20W原液稀•释到1480山1%MeOH/HCl后放置到1.5ml石英比色杯以稀释液做对照进行测量。(2)测量花瓣的萃取物的吸收光谱，萃取液用1%MeOH/HCl稀释，直到所有的垂要的峰都能够在分光光度计的测量范围内显现(吸收值最好位于0.5和1.5Z间)。评估：■收集最重耍的峰•标样与花朵萃取物的最大值・糖基化对吸收峰最大值有什么影响・在萃取的花里而，哪些花青素甘可能是成色的主要组成部分。