四川理工学院微生物菌种选育实验指导

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1、《微生物菌种选育实验》是一门涉及食品理化分析、微生物淫实验月.由学生自行设计实验方案的综合性、设计性实验课程，集中三周时间开课。一、实验目的通过本环节训练，加深对发酵工程上游技术屮菌种筛选的认识；学会常规选种方法;掌握微牛物诱变育种的方法；掌握常规工业微主物菌种保藏法；树立科学认真仔细的态度，培养科研协作精神。二、实验内容实验一工业微生物菌种筛选根据一定的生产目的如产酶、产酸、产酯等，建立不同的筛选模型，并从特定的样品如曲•药、酸乳、土壤中筛选出高产适宜的菌株。1、采样2、增殖培养3、纯种的分离；4、高产菌株的初筛；5、高产菌株的复筛。实验二微生物的诱变育种用紫外线对实验一所得的高产菌株

2、进行诱变，并测定诱变后的菌株的生产能力。1、岀发菌株的选择；2、同步培养;3、单细胞（或单抱了）悬液的制备；4、诱变处理;5、中间培养；6、分离和筛选。实验三菌种保藏采用合适的方法对实验二所得菌种进行保藏。三、实验要求1.学生自行设计具体实验方案，在教师指导下由学生自主完成实验。2.实验结束后，耍求学生完成一篇微型小论文。论文的撰写应木着实事求是的原则，对所做实验过程和数据进行认真、严格的记录和处理，并进行独立分析，不得抄袭他人的数据。四、考核办法1、考核内容：实验方案、实验态度、操作技能、实验报告等。2、考核办法：按照实验方案、实验态度、操作技能、实验报告等内容综合考核学生，得到学生该

3、门实验课程的成绩。成绩考核采用优秀、良好、中等、及格、不及格五级记分制。3、考核标准：以实际操作技能和分析解决问题的技能为主，实验考核内容各单项所占分数比例为实验方案20%、实验态度10%、操作技能40%、实验报告30%o微生物菌种选育概述微生物的菌种对进行微生物工作来讲是非常重耍的。没有“种”无法进行微生物的科学研究；没有良种，不能进行发酵工业的生产。所以微生物的很多工作都是围绕着一个“种”字而进行的。菌种选育包括选种和育种两方面的内容。选种是根据微生物的特性，挑选岀符合需要的菌种，一方面可以根据有关信息向菌种保藏机构、工厂或科研单位直接索取；另一方面根据所需菌种的形态、生理、生态和工

4、艺特点的要求，采用各种分离筛选方法，从自然界特定的生态环境中以特定的方法分离出新菌株。其次是育种的工作，根据菌种的遗传特点，在已冇的菌种基础上，采用诱变或杂交等方法，迫使菌种发生变异，改良菌株的生产性能，使产品产量、质量不断提高。第三当菌种的性能下降吋，述要设法使它复壮。最后还耍有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合，这样菌种的优良性能才能充分发挥。第一节工业微生物的分离筛选菌株分离、筛选虽为两个环节，但却不能绝然分开，因为分离中的一些措施木身就具冇筛选作用。工业微生物产生菌的筛选一•般包括两大部分：一是从自然界分离所需要的菌株，二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。菌

5、株的分离和筛选-•般可分为采样、富集、分离、产物鉴别几个步骤(见图)。调査胡兖并充分查闻资科设计试验才字I确定采祥的生态环境尿祥IJ确蒯走的増龜条件増殖塔养I］确定定I生戒半定虽的快速检负方法蝇翻离I原种步I面轟定轴的基本条件初弼(映速检测或一苗株1愆刖咅养训1定)I复筛(一菌株3%揺類)

6、结合初步的工艺条件较优菌株斜面(3为菌株)生产性能试验诲性试验菌种俣敲及作为进一步育种的出发帝株一、采样(-)从土壤屮釆样土壤样品往往是首选的采集目标：土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方；从土壤屮几乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤。土壤屮微生物

7、分布规律：一般情况下，土壤中含细菌数量最多，H每克土壤的含菌量人体冇如下的递减规律:细菌(108)＞放线菌(107)＞霉菌(106)＞酵母菌(105)＞藻类(104)＞原生动物(103),其中放线菌和霉菌指其抱子数。在分离菌株前要根据分离筛选的口的，到相应的环境和地区去采集样品：因为各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。1、土壤有机质含量和通气状况(1)耕作土、菜园土和近郊土壤适合于细菌、放线菌生长。(2)山坡上的森林土适合霉菌、酵母菌生长繁殖。(3)采土样最好的土层是5—25cm。2、土壤酸碱度和植被状况土壤酸碱度会影响微生物种

8、类的分布。偏碱的土壤(pH7.0—75)环境，适合于细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤(pH7.0以下)环境下，霉菌、酵母菌生长吒盛。3、地理条件4、季节条件秋季采土样最为理想。5、采样方法用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5—25cm处的土样10—25g,装人事先推备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥，可在10-30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死